本方法采用高效液相色谱法测定硫酸依替米星中依替米星（C₂₁H₄₃N₅O₇)的含量。

本方法适用于硫酸依替米星中依替米星的含量测定。

取依替米星对照品适量，精密称定，加流动相溶解并制成不同浓度的溶液，精密量取注入液相色谱仪，记录色谱图。以对照品溶液浓度的对数值与相应的峰面积对数值计算回归方程，另取本品适量，加流动相溶解，同法测定，用回归方程计算供试品中C₂₁H₄₃N₅O₇含量，即得。

1. 甲醇

2. 三氟醋酸

1. 仪器

1.1 高效液相色谱仪

1.2 色谱柱

十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（pH范围0.8-8.0)。

1.3 蒸发光散射检测器

2. 色谱条件

2.1 流动相：0. 2mol/L三氟醋酸溶液＋甲醇=84 16

2.2 流速：0.5mL/min

2.3 漂移管温度：100℃

2.4 柱温：室温

2.5 载气流量：2.6L/min

1. 对照品溶液的制备

精密称取依替米星对照品适量，加流动相溶解并定量稀释制成每1mL中约含依替米星1.0、0.5、0.25mg的溶液，摇匀，即为对照品溶液。

2. 供试品溶液的制备

取本品适量，精密称定，加流动相溶解并定量稀释成每1mL中约含0. 5mg的溶液，摇匀，即为供试品溶液。

注：“精密称取”系指称取重量应准确至所取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。

精密量取不同浓度对照品溶液20μL注入高效液相色谱仪，记录色谱图，以对照品溶液浓度的对数值与相应的峰面积对数值计算回归方程，相关系数（r)应不小于0.99。另取供试品溶液，同法测定，用回归方程计算供试品中C₂₁H₄₃N₅O₇的含量。

中华人民共和国药典，国家药典委员会编，化学工业出版社，2005年版，二部，p.740-741。