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鸡肠-氨基酸的含量测定-HPLC
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方法名称:
  鸡肠-氨基酸的含量测定-HPLC
应用范围:
  本法可用于鸡肠中氨基酸的含量测定
方法原理:
 鸡肠洗净绞碎冷冻研细用丙酮: 氯仿(3∶1 V:V ) 的溶液洗涤,再加入112ml内含1%苯酚的6mol/L HCl 溶液水解, 经液相色谱分离,在254nm处测定峰面积,外标法计算含量
仪器设备及实验条件:
 

仪器设备  Waters 高效液相色谱仪(包括810数据库, 510, 441紫外吸收检测器) , P ICO·TA G工作台, P ICO·TA G氨基酸分析专用柱(15cm ×319mm , C18, 孔径3Lm) , 微波炉(RE-630D

色谱条件  检测器波长为254nm , 色谱柱温为38℃,流动相A为乙酸钠和乙腈混合液, pH6140, 流动相B为60% 乙腈水溶液, 流动相采用曲线型梯度淋洗法。衍生液为P ITC:乙醇:三乙胺:水(1∶7∶1∶1, 体积比) , 稀释液为Na2HPO4 的水溶液, pH7140
试样制备:
  供试品溶液的制备  将鸡肠用水充分洗净, 经绞肉机绞碎, 混匀, 放入冰箱中冷冻。取出用研钵研细, 然后用丙酮:氯仿(3∶1 V:V ) 的溶液多次提取, 过滤,挥干溶剂,称7m g 样品于聚四氟乙烯罐内,加入112ml内含1%苯酚的6mol/L HCl溶液,施紧内外盖,放入微波炉内进行微波水解7m in,水解完毕后用水转移定容至5ml。取25μL此溶液在PICO-TAG工作台上进行抽真空干燥和衍生, 最后用稀释液稀释, 取10ul 进样分析。
操作步骤:
  按上述色谱条件,分别取对照品及供试品溶液10μL 进样,用钩藤碱和黄芩苷峰面积计算各指标成分的含量。
附件:
 
备注:
 
参考文献:
  尚素芬,王洪. 鸡肠中氨基酸含量的高效液相色谱分析. 氨基酸和生物资源.1997.19.(1);22~24
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