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金荞麦—表儿茶素的含量测定—HPLC
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方法名称:
  金荞麦—表儿茶素的含量测定—HPLC
应用范围:
  本方法适用于金荞麦中表儿茶素含量的测定
方法原理:
 本品细粉加50 %乙醇回流提取,经液相色谱分离,在280 nm处测定峰面积,外标法计算含量
仪器设备及实验条件:
 

仪器  Waters 600E高效液相色谱仪、2487双波长紫外检测器、Millennium32 色谱管理系统

色谱条件  色谱柱:Symmetry  C18(150 mm×3.9 mm,5 μm);流动相:水(用磷酸调pH值至3.00±0.02)—乙腈(92:8);流速:0.8 mL/min;检测波长:280 nm;柱温:35 ℃;进样量:10 μL

试样制备:
 

对照品溶液制备   精密称取(-)-表儿茶素对照品适量,加乙腈-水(1:9)制成含(-)-表儿茶素30 μg/mL的溶液,即得。

  供试品溶液制备   取本品细粉约2.5 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入50 %乙醇50 mL,密塞,称定质量,放置过夜,加热回流1 h,放冷,再称定质量,用50 %乙醇补足减失的质量,摇匀,滤过,精密量取续滤液25 mL,减压浓缩至近干,残渣加乙腈-水(1:9)分次洗涤,洗液转移至10 mL量瓶中,加乙腈-水(1:9)至刻度,摇匀,离心(3000 r/min)5 min,精密量取上清液5 mL,加入聚酰铵柱(30~60目,3 g,内径1.0 cm,湿法装柱),以水30 mL洗脱,弃去水液,再用甲醇100 mL洗脱,收集洗脱液,减压浓缩至近干,残渣加乙腈-水(1:9)使溶解并转移至10 mL量瓶中,加乙腈-水(1:9)至刻度,摇匀,用微孔滤膜(0.45 μm)滤过,取续滤液,即得。

操作步骤:
  分别精密吸取(-)-表儿茶素对照液以及金荞麦供试品溶液各10 μL,注入液相色谱仪,按上述色谱条件测定峰面积。以外标法计算(-)-表儿茶素含量。
附件:
  点击下载 (解压密码:www.med126.com)
备注:
 
参考文献:
  何美珊,钱炳辉,王兆龙等. HPLC法测定金荞麦中(-)-表儿茶素含量. 中草药 .2005,36(3)︰441~442
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