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第6版教材新增知识点--- 外科学部分2
来源:医学全在线 更新:2006/10/20 字体:

 

第二节    分子诊断

    长期以来,疾病的诊断主要依据病史、症状、体征和各种辅助检查,如血液学、病理学、免疫学、微生物学、寄生虫学乃至物理学检查等。然而,上述检查方法都具有其各自的局限性,使得许多疾病未能被及时准确地诊断,从而延误了治疗良机。因为许多外科疾病在病人出现症状、体征及生化改变之前就已存在相当一段时间,所以人们一直在盼望能找到一种技术,在疾病一旦发生,甚至尚未出现症状、体征及生化改变之前,就能作出诊断;对于某些可能的致病因素,包括食品、水质、环境中存在的病原体,人们也期望能有简单准确的方法及时进行检测。分子生物学技术的发展使人们渴望已久的上述愿望得以实现,这种在分子生物学理论和技术发展基础上建立起来的一门全新的诊断技术就是分子诊断。
    生物大分子主要指核酸(DNA和RNA)和蛋白质,通过从分子水平上完成DNA, RNA或蛋白质检测,从而对疾病作出诊断的方法称为分子诊断,目前常用的方法有基因诊断和肿瘤标志物检测两种。

   (一)基因诊断

    基因诊断是用分子生物学的理论和技术,通过直接探查基因的存在状态或缺陷,从基因结构、定位、复制、转录或翻译水平分析基因的功能,从而对人体状态与疾病作出诊断的方法。基因诊断检测的目标分子是DNA或RNA,反映基因的结构和功能。检测的基因有内源性(即机体自身的基因)和外源性(如病毒、细菌等)两种,前者用于诊断基因有无病变,后者用于诊断有无病原体感染。
    基因诊断的意义在于不仅能对某些疾病作出确切诊断,如确定某些遗传病,也能确定基因与疾病有关联的状态,如对疾病的易感性、发病类型和阶段的确定等。就目前已经开展的工作而言,外科领域的遗传性疾病、遗传易感性疾病、多种恶性肿瘤、感染性疾病、器官移植反应等都可以用基因诊断的方法加以诊断。
    基因诊断的主要技术有核酸分子杂交、聚合酶链反应和生物芯片技术。

   1.核酸分子杂交技术

   (1)原理
    具有一定互补序列和核昔酸单链在液相或固相中按碱基互补配对原则缔合成异质双链的过程,称为核酸分子杂交。杂交的双方是待测核酸序列和探针序列。应用该技术可对特定DNA或RNA序列进行定性或定量检测。

   (2)基因探针及其标记
    基因探针是一段与待测DNA或RNA互补的核昔酸序列,可以是DNA或RNA,长度不一,可为完整基因,也可为其中一部分。根据探针的来源和性质分为基因组DNA探针、cDNA探针、RNA探针和人工合成的寡核昔酸探针。作为探针至少必须满足两个条件,一是应为单链(或通过变性形成单链),二是应带有可被示踪和检测的标记。有了合适的探针,就有可能检测出目的基因,观察有无突变,也可根据探针的结合量进行定量检测。选择探针最基本的原则是要有高度特异性,其次也需考虑到制备探针的难易性和检测手段的灵敏性等其他因素。

   (3)常用核酸分子杂交技术
    ①Southern印迹杂交;②Northern印迹杂交;③斑点杂交( dotblotting);④原位杂交(in situ hybridization);⑤夹心杂交(三明治杂交);⑥液相杂交。

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