一、基本原理
很早以前，人们就注意到给动物饲以大量的鸡蛋白，会引起明显的“维生素H缺乏症”，也称为“蛋白质伤害”。经研究发现，在鸡蛋白中含有一种碱性蛋白，分子量为68000，属于糖蛋白，当时命名为卵白素（Avidin)，卵白素具有4个同维生素H（Riotin,又名生物素)亲合力极高的结合点。给动物饲以大量鸡蛋白所致的维生素H缺乏，就是由于卵白素和大量的维生素H结合所致。维生素H（以下统称生物素)是一种小分子的维生素，分子量为244，系转氨甲酰基化过程中的辅酶，它与卵白素之间有很强的亲合力，较之抗体对抗原的亲合力要高出100万倍，能够彼此牢固结合而不影响彼此的生物学活性。同时，生物素与卵白素都具有与其它示踪物质如荧光素、铁蛋白和过氧化酶等相结合的能力。免疫细胞化学工作者利用上述特性，建立了卵白素—生物素免疫染色系统。由于维生素H习惯上称为生物素，为便于理解，现在译名上统称卵白素为抗生物素或亲合素。所以卵白素—生物素免疫染色系统又称为抗生物素—生物素免疫染色法。
二、几中抗生物素—生物素染色法
1．抗生物素—生物素—过氧化酶复合物技术（Avidin Biotin –Peroxidase Complex technique, 简称ABC技术)
（1)基本原理：ABC法是Hsu 等于1981年在HRAB法和LAB法的基础上改良的，其特点是利用抗生物素分别连接生物素标记的第二抗体和生物素标记的酶。与LAB法和BRAB法不同的是第一抗体不为标记物所标记，生物素标记的第二抗体与ABC复合物相连接。复合物是将过氧化酶结合在生物素上、再将生物素—过氧化酶连接物与过量的抗生物素蛋白反应而制备的（图6-1)，最后进行显色反应定位。
图6-1 ABC法
（2)操作步骤
①冰冻切片或石蜡切片均可。
②冰冻切片可用丙酮固定10min左右，0.01mol/l PBS (pH 7.2～7.6) 洗5min，更换3次。石蜡切片需经脱蜡，系列酒精至水。
③第一抗体，室温孵育15min。
④PBS洗5min，更换3次。
⑤加生物素标记的第二抗体（1：200左右)，孵育15min。
⑥PBS洗5min，更换3次。
⑦加ABC复合物室温作用15min 。
⑧PBS洗5min，更换3次。
⑨用DAB—H2O2液（配法见附录)显色。
⑩复染。
⑾封片、观察。
ABC复合物的配制：经试验，生物素与抗生物素之比为1：4时，能获得最佳满意效果。即抗生物素10μg/ml加2.5μg/ml生物素，应用0.05mol/l Tris—HCl液，pH7.6，在应用前30min配制。
