针对外来抗原的抗体分子（Ab1)可变区上Id可刺激机体产生相应的抗Id抗体（Ab2)。Ab2β具有与外来抗原相似的氨基酸排列顺序或空间构型，它能够在体内模拟始动抗原的作用。应用Ab2β的这一特性，可有目的地制备Ab2β，将其作为抗原的替代物用于基础和临床医学研究。

　　一、抗独特抗体的制备

　　（一)抗原及其用量的选择

　　由于Ab2是针对Ab2Id的抗体，因而制备Ab2时应选择适当的Ab1作为免疫原。所用抗原的用量依照给予抗原的种类、次数、途径以受体动物的耐受性而有所不同。一般来说，当受体动物为小鼠时，常用Ab1最为50-200μg；若受体动物为家兔时，使用的Ab1量可达100-200μg。

　　（二)免疫动物的选择

　　抗独特型抗体可在自身体内、同类系、同种异体以及异种动物中诱导产生，因此在制备抗独特型抗体时可根据不同情况选用同类系、同种异体或异种动物（表9-1)。从制备技术上讲，可以制备单克隆抗Id和多克隆（免疫血清)抗Id。

表9-1 不同宿主免疫系统识别的抗体决定簇及抗独特型抗体的制备

　　1.同类系动物　用某一种抗原免疫某一品系的动物，分离纯化的Ab1再免疫相同品系的另外一只动物，可获得抗独特型体。例如Uytdegaag等将Ⅱ型脊髓灰质炎病毒免疫BALB/c小鼠，经杂交瘤技术制备了单克隆抗体（Ab1),再用Ab1免疫BALB/c小鼠，制备了单克隆Ab2。

　　2.同种异型动物　Seto等从一只品系为a3b4家兔血清中纯化出IgG作为Ab1，然后免疫B/J品系家兔，得到了含有Ab2的免疫血清。用此方法制备的抗血清中，除了含有抗Id外，还含有抗同种异型决定簇的抗体。

　　3.异种动物　例如用人IgM作为Ab1免疫小鼠制备单克隆Ab2。由异种动物免疫制备的Ab2血清中，除抗Id外还含有抗同种型的抗体。

　　（三)抗独特型抗体的检测

　　抗Id抗体的鉴定至关重要。通常采用免疫学检测方法如ELISA、RIA、免疫荧光和中和试验等，可根据具体条件和需要加以选用。抗Id的鉴定必须设置充分的对照，确保检测结果的可靠性。例如，在鉴定小鼠源性抗原特异性人IgM抗独特型抗体时，用正常人IgM作为对照。将Ab1（抗原特异性人IgM)包被微孔板，然后加检测样品（小鼠源性抗Id)，再加抗鼠的标记抗体，为了克服非特异性鼠抗人IgM同种型Ig造成的假阳性，同时用非特异性人IgM包被微板作为对照（图9-9)。当试验孔为阳性、对照孔为阴性时可基本确定为抗Id抗体。

图9-9 用ELISA间接法检测鼠源性单克隆抗Id示意图

　　二、抗独特型抗体在医学中的应用

　　抗独特型抗体不仅对于免疫应答调节的理论研究具有重要意义，而且在传染性疾病的预防、自身免疫性疾病发病机理研究和恶性肿瘤的治疗等应用研究中也具有重要的价值。

　　（一)抗独特型抗体与疫苗

　　抗独特型抗体中Ab2β作为抗原的模拟物，可代替病原体的抗原，诱导机体产生抗病原体的特异性免疫应答，即所谓抗独特型疫苗（anti-idiotype vaccine)。目前，抗独特型疫苗研究仍处于动物实验研究阶段，疫苗的范围主要有病毒、细菌和原虫等引起的传染病（表9-2)。

　　1.抗病毒的抗独特型疫苗　针对病毒感染的抗独特型疫苗是近年来较活跃的研究领域。Reagan将狂犬病毒糖蛋白特异的单克隆抗体免疫动物，制备出抗Id抗体，将这些抗体注射小鼠后，可诱导出具有病毒特异性中和活性的抗体应答。Kennedy等用抗HBsAg抗体制备出抗独特型抗体，经亲和层析纯化后注射于BALB/c小鼠，诱导产生针对HBsAg的体液免疫应答。

　　Uytdehaag等用对Ⅱ型脊随灰质炎病毒特异的保护性单克隆抗体（Ab1)免疫BALB/c小鼠,制备出单克隆Ab2，用Ab2免疫BALB/c小鼠后，可诱导出Ab3，产生抗脊髓灰质炎病毒的保护性免疫，这种单克隆Ab2可用于预防Ⅱ型脊髓灰质炎病毒的感染。Tanaka等在BALB/c小鼠中用抗新城疫病毒（NDV)血凝素的抗体诱导出抗Id抗体，在无病毒抗原存在的情况下，这种抗Id抗体可刺激小鼠产生抗NDV抗体。Lathey用单纯疱疹病毒（HSV)糖蛋白D特异的McAb制备了抗Id抗体，并在小鼠中诱发对HSV的免疫应答。用人工合成HIV包膜抗耕牛的735-752氨基酸段的多肽免疫黑猩猩制得Ab1，再用Ab1免疫家兔制备Ab2，将Ab2免疫小鼠获得Ab3，实验表明，Ab3能与HIV多肽抗原发生特异性结合。

图9-10 HBsAg抗Id的实验研究（Kennedy,1984)

　　2.抗细胞菌和原虫的抗独特型疫苗　抗Id抗体也可用于诱导针对细菌和原虫的保护性免疫应答。例如，用Ab2诱导动物针对肺炎球菌、大肠杆菌（K13)、血吸虫和罗德西亚锥虫等病原体的保护性免疫。其Ab2的制备和研究方法与病毒性抗Id疫苗研究类似。

　　抗Id作为疫苗有以下优点：（1)不含有传染性物质；（2)可大量制备抗Id的McAb；（3)某些保护性抗原决定簇为碳水化合物，不能用DNA重组技术获得，而某些抗Id可模拟碳水化合物抗原决定簇；（4)能诱导比灭活病毒更为有效的T细胞应答；（5)诱导抗原决定簇特异性的抗Id疫苗。应该看到，抗Id疫苗的免疫应答水平一般较低，大剂量鼠源性免疫球蛋白可能刺激机体产生抗异种蛋白的免疫反应以及过敏反应。因此，在临床实际应用中，制备人源性抗Id疫苗，应该看到，抗Id疫苗的免疫应答水平一般较低，大剂量鼠源性免疫球蛋白可能刺激机体产生抗异种蛋白的免疫反应以及过敏反应。因此，在临床实际应用中，制备人源性抗Id疫苗，提高抗Id疫苗的免疫原性，以及细胞工程和基因工程相结合等方面有待进一步深入研究。

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