实验十五  结核分枝杆菌

结核分枝杆菌(结核杆菌，M. tuberculosis)是分枝杆菌属(Mycobacterium)中的主要病原菌。目前，已知对人类有致病性的有人型、牛型和非洲型结核杆菌。本菌菌体细长或略带弯曲，有分枝生长的趋势。一般不易着色。一旦着色，能抵抗盐酸酒精的脱www.med126.com/jianyan/色作用。专性需氧，营养要求高，而且生长缓慢，在特殊培养基上培养10～20d才出现肉眼可见的菌落。

（一)培养特性

【材料与方法】

1．观察人型结核杆菌、牛型结核杆菌和耻垢杆菌在改良罗氏培养基斜面3～6W培养物的菌落形态。

2．观察人型结核杆菌在改良苏通半流体琼脂培养基中的生长情况。

【结果】

各型结核杆菌在罗氏培养基上的菌落呈干燥颗粒状。因菌型、培养条件以及暴露光线的程度不同，色素形成有差异，人型结核杆菌呈乳酪色，耻垢杆菌的色泽最鲜艳。菌落不透明，表面呈皱纹状，形似花菜心。在改良苏通培养基内，人型结核杆菌呈表面菌膜生长，有毒株则成索状生长。

（二)抗酸染色法(Acid-fast stain)

【原理】

结核杆菌对苯胺染料一般不易着色。若加温或延长染色时间使其着色后，再用3％盐酸酒精处理也不易脱色，经此法染色后，结核杆菌及其他分枝杆菌呈红色，其他非抗酸菌和细胞杂质等均呈蓝色。

【材料与方法】

1．用竹签挑取开放性肺结核病人晨痰标本干酪样小粒或脓性部分，置清洁载玻片中央，均匀涂片，干燥，固定。

2．滴加浓石炭酸复红液于涂片上，夹住玻片，置于火焰上缓缓加热，至有蒸汽冒出，约维持5min。切勿沸腾，亦不可使染液干涸。如有干涸的趋势，应补加染液。用流水漂去多余的染液。

3．滴加3％盐酸酒精脱色，至涂片较厚处无颜色脱出为止，水洗。

4．滴加碱性美蓝液复染1min，水洗。

5．吸干后镜检。

【结果】

抗酸菌染成红色，细胞及其他细菌染成蓝色。结核杆菌和麻风杆菌经抗酸染色后镜检，有各自的鉴别要点(表15-1)。

表15-1 结核菌与麻风菌的镜下鉴别要点

麻风杆菌结核杆菌

排列 呈束状或团状  散在

菌细胞  粗直 细长、微弯曲

涂片中的数量  较多 较少

检出标本病变组织痰、尿、粪等

（三)结核杆菌检验程序

采集尿、粪便、脑脊液、胸腹水等标本，按下图程序进行检验。

  直接涂片抗酸染色镜检

抗酸染色

 荧光染色

标本

沉淀集菌液体培养基生化反应

  处理   漂浮集菌  培养   固体培养基药敏试验

  酸碱消化

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