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医学微生物学-实验指导:实验一 显微镜的使用
来源:南华大学资源网 更新:2013/9/10 字体:

第一部分  细菌学

实验一  显微镜的使用

微生物个体微小,肉眼不能看到,必须借助光学显微镜或电子显微镜,将其放大上百倍、上千倍、甚至于上万倍,才能看清。因此,必须熟练掌握光学显微镜的使用和保护,尤其是油镜的使用和保护。

一、光学显微镜(油镜)的使用与保护方法

原理

光线从标本玻片经空气进入镜头时,由于介质密度不同而发生折射现象,因此进入物镜中的光线很少。当使用高倍或低倍物镜时,透镜的孔径比较大,影响不显著;但油镜透镜孔径很小,射入镜内的光线很少,视野暗,物象模糊不清。如在玻片上加上折光率与玻片(n=1.52)相近的香柏油(n=l.515),就可避免光线的分散,加强视野的亮度,获得清晰的物象。

材料与方法

1.油镜的识别 

普通光学显微镜的构造(图1-1)。观察微生物标本最常用的是油镜,油镜头上标有100×或125×,镜头前端有黑或白色的圆圈,刻有“HI”或“oil”等,其孔径也较其他物镜小。

图1-1  普通光学显微镜的构造

2.油镜的使用

(1) 对光:用低倍镜对光调至视野最亮,要抬高聚光器,放大光圈。以天然光线为光源时,使用平面反光镜;以灯光为光源时,使用凹面反光镜。

(2) 将标本固定在载物台上,先用低倍镜并找到标本之适当位置,然后换用油镜。

(3) 在玻片上滴香柏油1~2滴。用眼从侧方看着物镜,缓慢转动粗调节器,使物镜头浸于油滴内,并几乎与玻片接触为止,但切勿使两者相碰,防止损伤镜头或玻片。然后从目镜观察,仔细转动粗调节器,看到模糊物象时,再调动细调节器,使物象清晰。未能看到物象时,可重复上述操作。

(4) 观察标本时应两眼同时张开,左眼观察,右眼用于绘图并记录结果。

(5) 标本观察完毕,向上转动执业药师粗调节器将镜筒提起,取下标本,用擦镜纸将镜头上的油擦净。若油已医学全.在线干,可用擦镜纸沾少许二甲苯擦去油迹,随即用擦镜纸擦去二甲苯。

3.显微镜的保护

(1) 显微镜是贵重精密仪器,使用时要精心爱护,不得随意拆散和碰撞。

(2) 取送显微镜时,应右手持镜臂,左手托镜座,平端于胸前。

(3) 防止与强酸、强碱、乙醚、氯仿、酒精等化学药品接触。

(4) 擦镜头时,应顺其直径方向擦,不要转圈擦。

(5) 不用时,将接物镜转开呈八字,使其不正对聚光器。聚光器下降,罩上镜套,对号归位。

二、暗视野显微镜的使用方法

暗视野显微镜可在普通显微镜基础上,换一个暗视野聚光器,聚光器中央有一个黑色挡光板,光线不能直接进入镜筒,而只能从挡光板周边缝隙折射到载玻片的标本上。经反射作用而出聚光器,形成一个圆锥样的光柱。调节聚光器之高低,可使此圆锥的顶点(即焦点)恰在载物玻片的表面,此时如玻片上空无一物,或为完全透明之物体,则光线直穿而过,不能进入接物镜中,因之视野呈黑色,如玻片上有可以折光的物体(如细菌或其他颗粒)存在,则由聚光器而来的光线遇此物体,形成一个弥散反射,其中有一部分光线即经反射进入镜头,到达观察者的眼睛,此时所见者即为闪光的物体颗粒,衬托在黑色背景中,状如夏夜睛空中的点点繁星,异常清晰。如光线斜射到螺旋体,由于菌体与周围物体折光率不同而引起光散射发出亮光,反射到接物镜(图1-2)。

图1-2 暗视野显微镜光路原理示意图 

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