第一部分  细菌学

实验一  显微镜的使用

微生物个体微小，肉眼不能看到，必须借助光学显微镜或电子显微镜，将其放大上百倍、上千倍、甚至于上万倍，才能看清。因此，必须熟练掌握光学显微镜的使用和保护，尤其是油镜的使用和保护。

一、光学显微镜(油镜)的使用与保护方法

【原理】

光线从标本玻片经空气进入镜头时，由于介质密度不同而发生折射现象，因此进入物镜中的光线很少。当使用高倍或低倍物镜时，透镜的孔径比较大，影响不显著；但油镜透镜孔径很小，射入镜内的光线很少，视野暗，物象模糊不清。如在玻片上加上折光率与玻片(n=1.52)相近的香柏油(n=l.515)，就可避免光线的分散，加强视野的亮度，获得清晰的物象。

【材料与方法】

1．油镜的识别 

普通光学显微镜的构造(图1-1)。观察微生物标本最常用的是油镜，油镜头上标有100×或125×，镜头前端有黑或白色的圆圈，刻有“HI”或“oil”等，其孔径也较其他物镜小。

图1-1  普通光学显微镜的构造

2．油镜的使用

(1) 对光：用低倍镜对光调至视野最亮，要抬高聚光器，放大光圈。以天然光线为光源时，使用平面反光镜；以灯光为光源时，使用凹面反光镜。

(2) 将标本固定在载物台上，先用低倍镜并找到标本之适当位置，然后换用油镜。

(3) 在玻片上滴香柏油1～2滴。用眼从侧方看着物镜，缓慢转动粗调节器，使物镜头浸于油滴内，并几乎与玻片接触为止，但切勿使两者相碰，防止损伤镜头或玻片。然后从目镜观察，仔细转动粗调节器，看到模糊物象时，再调动细调节器，使物象清晰。未能看到物象时，可重复上述操作。

(4) 观察标本时应两眼同时张开，左眼观察，右眼用于绘图并记录结果。

(5) 标本观察完毕，向上转动执业药师粗调节器将镜筒提起，取下标本，用擦镜纸将镜头上的油擦净。若油已医学全.在线干，可用擦镜纸沾少许二甲苯擦去油迹，随即用擦镜纸擦去二甲苯。

3．显微镜的保护

(1) 显微镜是贵重精密仪器，使用时要精心爱护，不得随意拆散和碰撞。

(2) 取送显微镜时，应右手持镜臂，左手托镜座，平端于胸前。

(3) 防止与强酸、强碱、乙醚、氯仿、酒精等化学药品接触。

(4) 擦镜头时，应顺其直径方向擦，不要转圈擦。

(5) 不用时，将接物镜转开呈八字，使其不正对聚光器。聚光器下降，罩上镜套，对号归位。

二、暗视野显微镜的使用方法

暗视野显微镜可在普通显微镜基础上，换一个暗视野聚光器，聚光器中央有一个黑色挡光板，光线不能直接进入镜筒，而只能从挡光板周边缝隙折射到载玻片的标本上。经反射作用而出聚光器，形成一个圆锥样的光柱。调节聚光器之高低，可使此圆锥的顶点(即焦点)恰在载物玻片的表面，此时如玻片上空无一物，或为完全透明之物体，则光线直穿而过，不能进入接物镜中，因之视野呈黑色，如玻片上有可以折光的物体(如细菌或其他颗粒)存在，则由聚光器而来的光线遇此物体，形成一个弥散反射，其中有一部分光线即经反射进入镜头，到达观察者的眼睛，此时所见者即为闪光的物体颗粒，衬托在黑色背景中，状如夏夜睛空中的点点繁星，异常清晰。如光线斜射到螺旋体,由于菌体与周围物体折光率不同而引起光散射发出亮光，反射到接物镜(图1-2)。

图1-2 暗视野显微镜光路原理示意图