教研室

临床免疫检验

课程

名称

免疫学及检验

学时

4

检验专业2003 级   1、2、3班

带教时间

2006 年10月12 日---2006   年  10月 13 日

教师

姓名

王慧

职称

主管技师

实检（见习)项目

ELISA检测乙肝两对半

本次实验

（见习)

目的、

要求

1．掌握ELISA法检测“二对半”的原理、操作过程及注意事项

2．熟悉检测“二对半”的临床意义。

内容与安排

学时

一、介绍本次实验、见习的重点及安排

（实验课应包括：1、实验标本的采集，2、实验操作步骤，

3、实验操作过程注意事项，4、实验结果的评价及临床意义)

1、简介什么是“二对半”，为什么不检测HbcAg？

2、检测试剂盒的组成：主要介绍ELISA法的3种必备试剂，同时复习与理论相关内容

必备试剂

① 固相抗原或抗体------免疫吸附剂
 ② 酶标记的抗原或抗体------酶结合物
 ③ 酶反应的底物------底物

3、实验前准备：配制洗涤液

4、加样

5、温育

6、洗涤

7、显色

8、结果判断：比色法、目测法

9、注意事项：

1)标本的采取和保存：大部分ELISA 检测均以血清为标本。血清标本可按常规方法采集，应注意避免溶血，红细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质，，溶血标本可能会增加非特异性显色。血清标本宜在新鲜时检测。如有细菌污染，菌体中可能含有内源性HRP，也会产生假阳性反应。

抗凝不完全的标本因纤维蛋白原的干扰而造成假阳性，建议尽量不用抗凝血尤其是肝素抗凝剂。

2)加样：加样时应将所加物加在ELISA 板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可溅出。

3)保温：为避免蒸发，板上应加盖，也可用塑料贴封纸或保鲜膜覆盖板孔，反应板不宜叠放，以保证各板的温度都能迅速平衡。

4)洗涤：。通过洗涤以清除残留在板孔中没能与固相抗原或

抗体结合的物质，以及在反应过程中非特异性地吸附于固相载体的干扰物质。

10、临www.med126.com床意义

10、学生分组试验

二、讨论思考题：

1、底物A、B液成分？显色原理？

2、ELISA试验中，什么是钩状效应？为什么HbsAg含量高会造成假阴性结果？

3、ELISA试验中哪些因素会造成结果出现假阴性？哪些因素会造成结果出现假阳性？

3、ELISA检测“乙肝二对半”临床九种常见模式的临床意义？

三、小结要点

1、实验操作情况

2、注意洗涤要充分，拍板要干净

四、布置学生作业内容

1、书写实验报告(包括：实验目的、原理、器材和试剂、操作步骤、注意事项、、方法学评价、实验结果、结果分析及结论、讨论)

2、思考题

五、下次实验（见习)课预习范围及后续程介绍

下次实验课内容为：循环免疫复合物的检测

预习内容：什么是III型变态反应？

4学时www.med126.com/yaoshi/

教案制定时间：  2006  年 月  日   带教老师签名：王慧

专业主任审阅意见；

  签名：  年   月   日