心肌细胞动作电位

 目的和原理

 心肌细胞跨膜电位的产生与骨骼肌一样，是不同离子跨膜转运的结果。而心肌细胞膜上的离子通透和电位形成中涉及的离子流远比骨骼肌复杂的多。

 心肌细胞动作电位的形状及特征，与其他可兴奋细胞明显不同，它不仅时程长，而且可分为0、1、2、3、4五个时相。本实验用微电极插入心肌细胞内，记录其www.med126.com/Article/动作电位，以观察心肌细胞动作电位的形状及特征。

 实验对象：豚鼠(或兔)

 实验器材和药品

 电屏蔽装置及防震实验台。心肌标本槽、心肌灌流装置、氧气瓶、手术器械、双线示波器、微电极放大器、电刺激器、刺激隔离器、监听器、微电极推进器、玻璃微电极(尖端直径<0.5μm，内充3MKCl)、改良台氏液。

 实验步骤和观察项目

 一、仪器准备

 1、参照图连接仪器

图1实验装置示意图

 2、仪器调试：

 (1)调节微电极放大器零点，增益置于10倍处。

 (2) 电刺激器：刺激频率1Hz,波宽0.5～3ms，输出强度为10伏档级，通过微调选择适当刺激强度，同步输出触发示波器扫描。

 (3)示波器： DC输入，Y轴增益为20mv/cm，触发方式为外触发，X轴扫描时间为100～200ms/cm可供选择。

 二、标本制备与灌流：

 1、制备心室乳头肌标本：取体重500克左右豚鼠或2.5kg左右兔，用钝器重击颅枕部致昏迷后，迅速开胸取出心脏，用充O₂改良台氏液冲洗掉心室内血液，剪开心室腔，取出一条乳头肌，放入盛有台氏液的心肌标本槽内，用小钢针固定于底部的硅橡胶上。

 2、灌流：以恒温(35±0.5℃)充O₂的改良台氏液 (pH7.4±0.05) 灌流标本，流速约为4～8ml/min，标本稳定半小时后进行记录。

 三、心肌细胞动作电位引导：

www.med126.com/jianyan/ 1、通过微电极推进器将微电极插入标本槽。当电极接触液面，示波器基线上的交流干扰波显著减小，音响器发生变音，此基线位置即为零位线。继续推进微电极，一旦电极尖端插入心肌细胞内，荧光屏上基线突然下降，稳定在-80～-90mv水平，此数值即为心肌细胞静息电位。在此基础上，通过电刺激器、刺激隔离器以频率为1Hz,波宽1ms,强度为2倍阈刺激的方波脉冲刺激标本，即可记录到动作电位。

 2、细胞内电位变化经微电极放大器放大后，一路输入到示波器直接进行观察，一路输至监听器；另一路径A/D转移器输入微机，自动分析图形，计算跨膜电位参数。参数包括：静息电位(RP)、动作电位幅值(APA)、超射(OS)、0期最大去极化速率(Vmax)、复极化90%和50%时间(APS₉₀和APD₅₀)和动作电位时间(APD)。动作电位时程约200～300ms，分为0、1、2、3、4期；动作电位最大幅度通常在110～120mv左右，其中超射约20～30mv；0期最大去极化速率通常在200～300v/s，最大可达800v/s。