实习二、蛋白质功效比值(PER)课题设计

一、实验目的：

掌握蛋白质功效比值的概念及意义，了解动物实验的设计、分组及动物饲料的配制等。

二、实验原理：

蛋白质功效比值(protein efficiencyratio，PER)是测定蛋白质生物利用率最常用的方法，其定义为在严格规定的条件下，处于生长发育期的幼龄动物每摄入1g待测蛋白所增加的体重克数。本方法是美国公职分析化学家协会( AOAC)推荐的测定食物蛋白质营养效应的官方标准方法之一，国际上广泛应用。本法方便、具体，虽然动物摄入的蛋白质克数与体重增加之间并不成线性关系，但仍不失为评价蛋白质量的较好方法。此外，为了减少各实验室测定结果的差异，常以已经标定的酪蛋白（标准参考蛋白)的PER值为2.5，以此校正测得的PER值。本法适用于含氮量高于1.80%的物质。

三、实验动物

要求用同一来源、同一品系、年龄相近、刚断奶（出生21～28天)的雄性大鼠。实验室应保持各种环境条件适宜于大鼠的正常生长发育（室温22～24℃，相对湿度50%～65%，室内空气要流通)。动物在实验室适应3～7天才能投入实验使用。

四、动物分组

 每一种待测样品设一个实验组，外加一个参考（标准)酪蛋白组（阳性对照组)。大鼠按体重顺序，以随机区组法分组，每组动物不少于10只，每组动物数相同。各组动物平均体重组间差不大于5g，组内个体差不大于10g。

五、动物饲料配方

PER实验用合成饲料。基础饲料中各成分物质用量如下。

(1)样品量X（g)= 1.6×100／样品N(%)

(2)植物油（棉子油或豆油)为： 8-X×样品乙醚浸出物(%)/100

(3)混合无机盐为：5-X×样品灰分(%)

(4)混合维生素1

(5)纤维素为1-X×样品粗纤维(%)/100

(6)水分为5- X×样品水分(%)/100

(7)最后加玉米淀粉或蔗糖至100g，充分混匀。

在配制饲料前，应先测定样品中各种营养素的含量（蛋白质、脂肪、水分、纤维素和灰分)以使各组实验饲料及参考酪蛋白组饲料间各种营养素相等（达到AOAC标准)，使之相互之间具有可比性。实验组蛋白质来源为待测样品，而对照组（参考酪蛋白组)的蛋白质则要来自参考酪蛋白。

(1)参考酪蛋白：国外用ANRC（商品名称)酪蛋白，此物已经标化，其PER=2.50。如无ANRC酪蛋白，也可用经过标化的酪蛋白作为参考酪蛋白。

(2)混合盐（美国药典，USP)：称取NaCl 139.3g，取其一部分置乳钵中，加入0．79g KI，研磨，过60目筛，放入棕色瓶中。将余下的NaCl加入下列成分研磨：KH₂P0₄389.Og；CaC03 381.4g；MgS04（无水)57.3g； FeS0₄·7H₂027.Og；MnS0₄H₂0 4.01g；CuS0₄5H₂0 0.447g；ZnS0₄·7H₂0 0.54g；CoCl₂·6H200.023g；研匀后过60目筛，与已制备的NaCl-KI混合，棕色瓶储存备用。

(3)混合维生素：VitA（干燥稳定)2000IU,VitD（干燥稳定)200IU, VitE（干燥稳定)10 IU, VitK 0.5mg，胆碱200mg，对氨基苯甲酸10mg，肌醇10mg，烟酸4mg,VitB₂0.8mg, VitB1 0.5mg，泛酸钙4mg, VitB₆ 0.5mg，叶酸0.2mg，生物素0.04mg,VitB₁₂0.003mg，加葡萄糖或淀粉至1 000mg。

六、动物饲养：

实验期为28天，在此期间，动物单笼饲养，分别喂各组实验饲料。动物自由摄食及饮水。在实验期间尽可能保持实验组动物与参考（标准)酪蛋白组动物的全部环境条件一致。实验期间应记录：(1)实验开始时每只大鼠的体重（精确至O.lg)；(2)每天各只大鼠的饲料摄取量；(3)定期（最多4日)称量每只大鼠的体重；(4)实验最后一天记录大鼠的体重和摄食量。

七、实验结果处理及PER值计算

(1)计算每只动物28天内体重增长值(g)

(2)计算每只动物28天内蛋白质摄入量(g)

(3)计算PER

直观PER=体重增长值(g)／蛋白质摄入量(g)

相对PER%=直观PER×100／本实验参考酪蛋白PER

校正PER=直观PER×2.5／本实验参考酪蛋白医.学全在线PER

八、结果评价

根据各组平均PER值，结合其他蛋白质质量评价指标，对该样品的蛋白质质进行综合评价。

九、实例计算

请就以下实验结果，分别计算出脱脂大豆粉、浓缩大豆蛋白和分离大豆蛋白的直观PER、相对PER及校正PER。

PER实验结果   见表