本方法采用高效液相色谱法测定依托泊苷（C₂₉H₃₂O₁₃)的含量。

本方法适用于依托泊苷的测定。

取本品适量，精密称定，用流动相（乙腈 醋酸盐缓冲液=30 70)溶解并制成每1mL含0.2mg的溶液，精密吸取20μL注入高效液相色谱仪进行色谱分离，用紫外吸收检测器，于波长254nm处检测依托泊苷的吸收值，计算出其含量。

1. 乙腈（色谱纯)

2. 醋酸盐溶液：pH=4.0

1. 仪器

1.1 高效液相色谱仪

1.2 色谱柱

苯基硅烷键合硅胶为填充剂，理论板数按依托泊苷峰计算应不低于 3000。

1.3 紫外吸收检测器

2. 色谱条件

2.1 流动相：乙腈＋醋酸盐缓冲液（pH4.0)= 30 70

2.2 检测波长：254nm

2.3 柱温：室温

1. 称取供试品

精密称取本品粉末适量。

2. 对照品溶液的制备

精密称取依托泊苷对照品适量，加甲醇制成每1mL含依托泊苷 0.2mg的溶液。

3. 供试品溶液的制备

取本品适量，精密称定，用流动相（乙腈 醋酸盐缓冲液=30 70)溶解并制成每1mL含0.2mg的溶液。

注：“精密称取”系指称取重量应准确至所取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。

分别精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各20μL 注入高效液相色谱仪，用紫外吸收检测器，于波长254nm处测定依托泊苷吸收值，计算出其含量。

中华人民共和国药典，国家药典委员会编，化学工业出版社，2005年版，二部，p344。