本方法采用高效液相色谱法测定注射用普鲁卡因青霉素中普鲁卡因(C₁₃H₂₀N₂O₂)和青霉素(C₁₆H₁₈N₂O₄)的含量。

本方法适用于注射用普鲁卡因青霉素中普鲁卡因和青霉素的含量测定。

取本品适量，用流动相定量稀释，注入液相色谱仪，在235nm波长处检测，记录色谱图。另分别取普鲁卡因对照品和青霉素对照品各适量，流动相溶解并定量稀释，同法测定，按外标法以峰面积计算，即得。

1. 乙腈

2. 40%氢氧化四丁基铵溶液

3. 10%的稀磷酸溶液

4. 1mol/L氢氧化钾溶液

5. 磷酸二氢钾

1. 仪器

1.1 高效液相色谱仪

1.2 色谱柱

十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂。

1.3 紫外吸收检测器

2. 色谱条件

2.1 流动相：缓冲液（取磷酸二氢钾14g和40%氢氧化四丁基铵溶液6.5g溶解于700mL水中，用1mol/L氢氧化钾溶液调节pH值至7.0，再加水稀释至1000mL，摇匀)＋水 乙腈=52 23 25（用1mol/L氢氧化钾溶液或10%的稀磷酸溶液调节pH值至7.5±0.05)

2.2 检测波长：235nm

2.3 柱温：室温

1. 对照品溶液的制备

精密称取普鲁卡因对照品和青霉素对照品适量，加流动相溶解并稀释制成每1mL中分别含青霉素0.8mg和普鲁卡因0.54mg的溶液，摇匀，即为对照品溶液。

2. 供试品溶液的制备

取装量差异项下的内容物，精密量取适量（约相当于普鲁卡因青霉素70mg)，置50mL量瓶中，加流动相约30mL，超声使溶解后，用流动相稀释至刻度，摇匀，即为供试品溶液。

注：“精密称取”系指称取重量应准确至所取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。

分别精密量取供试品及对照品溶液10μL注入液相色谱仪，在235nm波长处检测，记录色谱图。按外标法以峰面积计算，即得。

中华人民共和国药典，国家药典委员会编，化学工业出版社，2005年版，二部，p.792。