方法名称: |
清热灵颗粒-连翘苷含量测定-HPLC-UV |
应用范围: |
用于清热灵颗粒中连翘苷的含量测定 |
方法原理: |
本品加甲醇超声提取,经液相色谱分离,在230 nm处测定峰面积,外标法计算含量 |
仪器设备及实验条件: |
仪器 SPD - LC10A 型高效液相色谱仪,包括SPD - 10A 紫外可见检测器(日本岛津公司);Oasis HLB C18 固相萃取小柱(美国Waters 公司,规格:3 mL 色谱条件 色谱柱:Dikma DiamonsiLTM C18(200 mm ×4.6 mm,5 μm);流动相:乙腈- 水(30∶70);流速:1.0 mL/min,检测波长:230 nm;柱温:30 ℃ |
试样制备: |
对照品溶液的制备 准确称取以五氧化二磷为干燥剂,减压干燥至恒重并研细的连翘苷对照品约10 mg,置于50 mL容量瓶中,加甲醇适量,超声处理使之溶解并稀释至刻度,摇匀,即得浓度为0.2 mg/mL的连翘苷对照品溶液。 供试品溶液的制备 取清热灵颗粒约1.0 g,准确称定,加甲醇20 mL,超声处理20 min,过滤,残渣以甲醇30 mL分次洗涤,连续3次,过滤,合并滤液,再置于水浴上蒸干。残渣再用水溶解,并定量移至25 mL容量瓶中,定容,过滤,混匀,弃去初滤液,取续滤液备用。准确量取续滤液2.5 mL,移入经事先活化过的SPE小柱上(依次加甲醇5 mL、水5 mL淋洗),待液体以约为1滴/s的速度流出后,再依次用水5 mL、20 %甲醇溶液5 mL以1滴/s的流出速度过柱,弃去流出液,最后用50 %甲醇溶液洗脱吸附在柱上的连翘苷,洗脱体积至近5 mL,以50 %甲醇溶液定容(洗脱液收集于5 mL容量瓶中),以0.45 μm的滤膜过滤,取续滤液即得。 |
操作步骤: |
分别精密吸取连翘苷对照液以及清热灵颗粒供试品溶液各20 μL,注入液相色谱仪,按上述色谱条件测定峰面积。以外标法计算连翘苷含量。 |
附件: |
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备注: |
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参考文献: |
况夏,王太. 固相萃取- 高效液相色谱法测定清热灵颗粒中连翘苷的含量.中国药房. 2005,16(20):1574~1575 |