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主权项
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一种筛选具有抗菌活性的肽类物质的方法，该方法的步骤为：A：将蛋白质组样品经过丙酮预处理以降低杂质含量；B：将处理过的样品在非变性条件下进行等电聚焦IEF，IEF之后从凝胶上切下两根宽度相同的IEF胶条，在缓冲液A中平衡后进行第二向的聚丙烯酰胺凝胶电泳，使用丙烯酰胺及甲叉双丙烯酰胺制备非变性凝胶，上槽缓冲液的组分为Tris-base，Tricine和SDS，恒压电泳至溴酚蓝前缘到达底部；C：将PAGE所得的两块胶分别处理，一块胶用考马斯亮蓝CBB染色，脱色后用做备份，另一块胶则经电印迹，将蛋白质斑点转移到NC膜上，使用不含SDS的缓冲液A；D：经过0.01～0.2MTris-Cl，pH＝7.5的缓冲液漂洗除去SDS，将NC膜真空干燥；E：在NC膜上均匀地分布细菌，使其密度达到1×103～1×105CFU/mm2后，将膜置于牛肉膏固体培养基上培养，该培养基含显色剂；同时含有细菌生长所需的底物，该底物经细菌代谢能产生酸性产物；在NC膜上正常生长的细菌由于其代谢产物呈酸性因而在其周围呈亮黄色，而有抗菌肽斑点的地方细菌生长受抑制，故而和周围呈现出色差，为暗色的斑点；F：将NC膜上的斑点与双向电泳所得到的凝胶上的斑点相对照，将凝胶上对应于NC膜上抗菌肽色斑的斑点切下，然后对这些斑点用质谱指纹图，N端序列分析，氨基酸组成分析进行微量鉴定。
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