| 公开(公告)号 | CN1327851C |
| 公开(公告)日 | 2007.07.25 |
| 申请(专利)号 | CN200510108351.5 |
| 申请日期 | 2005.10.12 |
| 专利名称 | 一种促肝细胞生长蛋白质的制备工艺及其注射剂制备方法 |
| 主分类号 | A61K35/407(2006.01)I |
| 分类号 | A61K35/407(2006.01)I;A61K9/08(2006.01)I;A61K9/19(2006.01)I;A61K38/27(2006.01)I;A61P1/16(2006.01)I |
| 分案原申请号 | |
| 优先权 | |
| 申请(专利权)人 | 郭斌阁 |
| 发明(设计)人 | 郭斌阁 |
| 地址 | 110003辽宁省沈阳市和平区和平南大街35号玛莉蓝大厦1602室 |
| 颁证日 | |
| 国际申请 | |
| 进入国家日期 | |
| 专利代理机构 | 北京华科联合专利事务所 |
| 代理人 | 王 为 |
| 国省代码 | 辽宁;21 |
| 主权项 | 一种促肝细胞生长素的制备方法，经过以下步骤： (1)对获得的乳牛或乳猪的新鲜肝脏进行刺激； (2)分散乳化使细胞破碎； (3)加入溶剂并加热； (4)冷冻沉淀； (5)离心得到粗提液； (6)柱层析得洗脱液； (7)洗脱液用超滤膜超滤，纯化得2～4万道尔顿区间的药物活性蛋白质；其特征在于，步骤1中所述刺激是乳牛或乳猪宰杀后应立即取肝脏，用刀立即将肝脏分割成6-8块、4℃放置1小时；步骤2中所述分散乳化使细胞破碎是，将步骤1刺激后的肝脏用绞肉机打成0.5cm的小块，然后以分散乳化机乳化20分钟，得到细腻均匀、呈乳白色的分散乳化液；步骤3中所述加入溶剂并加热是，将步骤2得到的分散乳化液加入3倍体积pH3.5的0.84％的盐水。加入十二烷基肌氨酸钠使终浓度达到0.05％，搅拌1小时，对提取液加热，至料液温度80℃恒温15分钟，接着加热至90℃恒温20分钟；步骤4中所述冷冻沉淀是用水冷却至室温，转入4℃冷库存放48小时，以沉淀油脂、杂蛋白和十二烷基肌氨酸钠；步骤5中所述离心得到粗提液，是取上清液，用无纺布过滤，用离心机离心，得澄清的粗提液；步骤6中所述的柱层析是将粗提液上层析柱，所述层析柱介质是阴离子或阳离子交换树脂，选自：阴离子大孔树脂、DE32-纤维素、DE52-纤维素、DEAE-SEPHADEX、DEAE-SEPHAROSE阳离子大孔树脂、CM-纤维素、CM-SEPHADEX、CM-SEPHAROSE。粗提液上层析柱后，先后用pH为8.0的含氯化钠0.20M的0.05mol/LTris-HCl溶液的A洗液和pH为8.0的含氯化钠0.70M的0.05mol/LTris-HCl溶液的B洗液洗脱，收集洗脱液；步骤7中所述洗脱液用超滤膜超滤，是以分子量为4万和1万道尔顿的超滤膜超滤，得到2-4万道尔顿区间的蛋白质。 |
| 摘要 | 本发明公开了一种促肝细胞生长蛋白质的制备工艺及其注射剂制备方法，步骤是：出生一个月内的乳牛或乳猪的肝脏用绞肉机绞碎，采用分散乳化机分散20分钟，加入含0.05％的十二烷基肌氨酸钠，破碎细胞，加热、泠沉沉淀杂蛋白，离子交换等纯化方法获得。其中的主要有效成分2.1万道尔顿蛋白质含量大于60％。含量测定、药效学和毒理学实验结果显示，本发明的促肝细胞生长蛋白质及其注射剂取材更方便容易，成本降低，药理药效与前人研究结果相当。 |
| 国际公布 |
