猪口蹄疫、猪水疱病反向间医学全在线接血凝试验致敏红细胞诊断液

本品系用口蹄疫病毒A、O、C、Asia I型毒种和猪水疱病病毒毒种分别高度免疫豚鼠或猪，分离血清，提取免疫球蛋白，致敏红细胞制成。用于口蹄疫和水疱病的鉴别诊断。

【性状】静置后，致敏红细胞沉于瓶底，上层为淡黄色透明液体。振摇后，致敏红细胞均匀分散于溶液中。

【作用与用途】用于鉴别诊断口蹄疫和水疱病的反向间接血凝试验。

【用法与判定】 (1)使用标准阳性血清对O型口蹄疫和猪水疱病进行鉴别诊断时，按以下方法。a.在96孔血凝滴定板上，每份被检样品做4排孔，每孔先各加25uL稀释液。b.每排第1孔各加被检样品25tuL，然后分别由左至右进行2倍系列稀释至第7孔(竖板)或第11孔(横板)。每排最后孔留作空白对照。c.加标准阳性血清在第1排和第3排，每孔加稀释液25uL。在第2排，每孔加入1：20稀释的O型口蹄疫标准阳性血清25uL。在第4排，每孔加入1：100稀释的猪水疱病标准阳性血清25uL。 放微型混合器上振荡1-2min，加盖，置37℃作用30min。d.加致敏红细胞诊断液在第1排和第2排，每孔加入1％O型口蹄疫抗体致敏红细胞悬液25uL。 在第3排和第4排孔，每孔加入1％猪水疱病抗体致敏红细胞悬液25uL。将血凝滴定板置微型混合器上振荡1-2min，加盖，放室温2h后观察结果。e.结果判定若第1排出现2孔以上的凝集(50％以上凝集)，且第2排相对应孔出现2个孔以上的凝集抑制；第3、4排不出现凝集，判为口蹄疫O型阳性。若第3排出现2个孔以上的凝集(50％以上凝集)，并且第4排对应孔出现2个孔以上的凝集抑制，第1、2排不出现凝集，则判为猪水疱病阳性。以能引起50％红细胞凝集的被检样品最大稀释度为被检样品的血凝效价。

(2)使用标准抗原对口蹄疫各型和猪水疱病进行鉴别诊断时，按下列方法操作。a.被检样品的稀释取试管8支，自第1管开始由左至右用稀释液进行2倍系列稀释(即1：6、1：12、1：24……1：768)，每管0.5mL。b.滴加被检样品  在血凝滴定板上的第1至第5排，每排的第8孔滴加第8管稀释被检样品2滴，每排的第7孔滴加第7管稀释被检样品2滴，以此类推至第1孔。每排的第9孔滴加稀释液2滴，作为稀释液对照，每排的第10孔按顺序分别滴加A、O、C、Asia工型口蹄疫和猪水疱病标准抗原(1：30稀释)各2滴，作为阳性对照(注意每型换滴管1支)。C.滴加致敏红细胞诊断液先将红细胞诊断液摇匀，于滴定板第1至第5排孔分别滴加A、0、C、Asia I口蹄疫及猪水疱病致敏红细胞诊断液，每孔1滴，置振荡器上振荡1-2分钟，放置20-25℃，1.5-2小时后判定结果。如果被检样品来自牛、羊等偶蹄兽，仅用口蹄疫4个型的致敏红细胞诊断液；如果被检材料来自猪，除用上述4种诊断液外，还用猪水疱病红细胞诊断液。d.结果判定  (a)观察血凝板上各排孔的凝集图形，如果只有第1排孔凝集，且稀释液对照孔不凝集，阳性对照孔凝集，则证明此种凝集是与A型红细胞诊断液同型病毒所致的特异性凝集，被检样品即判为A型。若只有第2排孔凝集，其余4排孔不凝集，则待检抗原为O型，以此类推。(b)致敏红细胞50％凝集的被检样品最高稀释度为其凝集效价。(c)出现2排孔以上的凝集时，如某排孔的凝集效价高于其余各排孔的凝集效价至少4倍，即可判为阳性，其余判为阴性。

【注意事项】保存与使用中，勿冻结，勿倒置。

【贮藏】在2-8℃，有效期为6个月。

附注：凝集反映强度标准

 ++++ 100％凝集。红细胞均匀地分布于孔底周围。

 +++  75％凝集。红细胞均匀地分布于孔底周围，但孔底中心有红细胞形成的针尖大的小点。

     ++ 50％凝集。孔底周围有不均匀的红细胞分布，孔底有一红细胞沉下的小点。

  + 25％凝集。孔底周围有不均匀的红细胞分布，但大部分红细胞已沉积于孔底。

     一 不凝集。红细胞完全沉积于孔底成一圆点。