2005《中国药典》收载的青霉素钾含量测定方法为HPLC法，试验条件同青霉素钠项下：色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.1mol/L磷酸二氢钾溶液（用磷酸调节pH值为2.5)-乙腈（70：30)为流动相；检测波长为225nm；流速为每分钟1ml。注射用青霉素钾的含量测定方法同。
    文献报道的方法：医学全在线网站www.med126.com
    叶兰凤等用HPLC法测定青霉素钾的含量。仪器：Agilent 1100高效液相色谱仪。色谱柱：ODS C 18柱(250mm×4.6mm,5um)，以乙腈-甲醇-0.0mol/L磷酸二氢钾溶液(15：10：75，用氢氧化钠试液调节PH值为5.3)为流动相，检测波长210nm。
    梁云爱等用二阶导数差示脉冲极谱法测定青霉素钾的含量。试验预置电压为-0.600V，脉冲振幅为40mV，扫描速度为300mV/s。
    另外，金录胜等用旋光法，在20℃下测定注射用青霉素钾的含量。