四神丸处方为：肉豆蔻200g，补骨酯（盐炒)400g，五味子（醋制)200g，吴茱萸（制)100g，大枣（去核)200g。
    2005《中国药典》四神丸含量测定项下：
    色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水（30：70)为流动相；检测波长为245nm。理论板数按补骨酯素峰计应不低于6000。
    供试品溶液的制备：取本品，研细，取1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇100ml，密塞，称定重量，超声处理（功率300W，频率33kHz)20分钟，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
    文献报道的常用方法现介绍如下：
    田玉先等HPLC法测定四神丸中五味子乙素的含量，色谱柱为C18柱(4.6×200mm,5μm)，流动相为甲醇-四氢呋喃-水(64：4：32)，检测波长254nm。样品用正己烷索氏回流提取。医.学.全.在.线www.med126.com
    陈伟等用SFE-CGC法测定四神丸中补骨酯素和异补骨酯素的含量，样品用SFE法处理，采用含5%苯基硅氧烷交联毛细管柱，蒽为内标液。气化温度250，检测温度280，柱温210，载气N2，柱头压55kPa，分流比50：1。
     甄攀等用HPLC法测定四神丸中吴茱萸碱和吴茱萸次碱的含量，色谱柱为YWG-C18 (250mm×4.6mm, 10μm)，流动相为水-甲醇-乙腈梯度洗脱：0-15min，水-甲醇-乙腈(40：30：30)；15-27min，乙腈-水(70：30)； 27min以后，水-甲醇-乙腈(40：30：30)。柱温30℃，检测波长225nm。
    谭生建等梯度洗脱变换波长HPLC测定四神丸中补骨酯素、异补骨酯素、吴茱萸碱和吴茱萸次碱的含量。以乙醇为溶剂，水浴回流提取。色谱柱为LUNA C18分析柱 (4.6mm ×250mm，粒径5μm)，ODS保护柱(5mm×50mm,粒径5μm)，柱温36℃，流动相甲醇(A泵)和水(B泵)，流速0.8ml/min。流动相洗脱及检测波长变换程序：0.01min，λ296nm，B泵40%，14 min，B泵40%，16min，B泵28%，28min，290nm，38min，λ360nm，45min，B泵28%。