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医学微生物学-实验指导:实验十一 霍乱弧菌
来源:南华大学资源网 更新:2013/9/10 字体:

实验十一  霍乱弧菌

霍乱弧菌(V.cholerae)可分为古典生物型和ElTor生物型;根据菌体抗原(O抗原)又可分为155个血清群,其中O1血清群和O139血清群是霍乱的病原菌,能引起霍乱的发病和流行。

形态与培养特性

www.med126.com/wsj/

【材料与方法】

1.霍乱弧菌革兰染色片。

2.霍乱弧菌(水弧菌代)碱性蛋白胨水培养物。

3.霍乱弧菌于TCBS培养基上的分离培养物。

【结果】

1.霍乱弧菌为革兰阴性菌,菌体弯曲呈弧形或逗点状,平行排列似鱼群状。

2.以悬滴法观察动力,细菌运动活泼,呈穿梭样或流星状。

3.霍乱弧菌在TCBS培养基上可形成较大、黄色的菌落。

附录:

(一)荧光菌球试验

【原理】

荧光菌球试验是一种新型的免疫荧光快速诊断技术。其原理是在细菌培养液中加一定量荧光抗体,然后接种标本,若粪便中有相应的病原菌时,抗体即与之结合发生凝集,凝集后细菌并不死亡,在适宜温度下仍能继续繁殖而集合成团,在荧光显微镜下呈现一团绒球样荧光,故称荧光菌球。

【材料与方法】

1.将霍乱弧菌接种于含有一定量荧光抗体的碱性蛋白胨水中,37℃增菌6~8h。

2.挑取1环上述培养物于清洁玻片上,放上盖玻片,在荧光显微镜下观察。

【结果】

荧光球大而发亮呈圆球状,结构较疏松,周围近似卷www.med126.com/pharm/发状。随孵育时间增长,菌球结构致密,周围较圆,整齐,菌球周围有刺毛,有的如银丝般缠绕。孵育时间短时,菌球往往呈多形性。

(二)制动试验

【原理】

霍乱弧菌在液体培养基中可见流星似的运动,若在培养液内加人霍乱免疫血清,则霍乱弧菌凝集,运动停止,称为制动试验。可用于霍乱弧菌的快速早期诊断。

【材料与方法】

1.取病人水样便6h蛋白胨培养液0.25ml,加适量稀释的霍乱免疫血清0.25ml,混匀。

2.取上述样品0.25ml,加0.25ml生理盐水混匀,作为对照。

3.置37℃5min,观察结果。

【结果】

凡凝成小块,动力消失者为阳性,反之为阴性。

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