教案

授课内容(章，节)

题 目

第二十二章 金免疫技术

授课教师单位

检验系

教研室

临床免疫

职称

主管技师

授课方式

大班

授课时数

2学时

授课对象     年级(系)  班

授课时间

2006  年 月   日

授课地点

12-2A

采用教材版本

中国医药科技出版社

教学目的与要求：

1、掌握胶体金的特性

2、熟悉胶体金及免疫金的制备

3、掌握金免疫测定技术的分类及各种试验的原理，熟悉金免疫测定技术的临床应用及评价

4、熟悉免疫金(银)光镜染色技术的原理

5、了解金免疫组织化学技术的临床应用与评价

授课内容(要点)

时间

分配

1、  复习免疫技术、标记免疫技术的概念、特点

2、  简述金免疫技术的发展史、分类及应用

3、  重点讲述胶体金的特性(胶体性质、光吸收性、呈色性)

4、  讲述胶体金的制备：原理、最常用的制备方法、操作要点、制备过程中的注意事项

5、  讲述胶体金的鉴定和保存

6、  简述免疫金的特性及制备原理

7、  免疫金的制备要点

8、  金免疫测定技术的基本原理，特点及分类

9、  斑点免疫渗滤试验的基本试剂组成

10、  斑点免疫渗滤试验的基本原理，操作示意

11、  重点讲述斑点免疫渗滤试验的技术类型：原理、质控

12、  斑点金免疫层析试验的试剂组成、基本原理

13、  重点讲述金免疫层析试验的分类、原理

14、  斑点免疫渗滤试验与金免疫层析试验的异同点总结

15、  简述金标法的优势、劣势

16、  简述免疫金(银)染色法的原理

17、  简述金免疫组织化学技术的临床应用

18、  总结

5分钟

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讲课重点和难点（采用何种方式或方法来解决)

1、  胶体金的特性：动画示意胶体金的胶体性质，图表显示胶体金的吸收性(胶体金的光吸收峰波长随颗粒的大小而变化)，颜色显示胶体金的呈色性(不同大小的胶体金呈现不同的颜色)

2、  免疫金制备要点：动画示意如何进行蛋白质最适标记量的确定

3、  斑点金免疫渗滤试验的原理：动画图示双抗体夹心法及间接法的原理，并举例说明

4、  斑点金免疫渗滤试验的质控：动画图示双抗体夹心法及间接法的质控方式，判断方式

5、  斑点金免疫层析试验的原理：动画图示双抗体夹心法、竞争法及间接法的原理，并举例说明

教学过程设计：（授课中对以下内容采取的措施)

1．加强基础与临床的联系：

A、临床上主要用到的金颗粒直径为5-20nm，呈红色；2-5nm主要用于组化技术

B、金免疫技术中的金免疫测定技术与临床关系较为密切，临床中的许多急诊项目，如HCG、HbsAg、HIV抗体等的检测都是采用金免疫测定技术进行测定

C、讲述斑点金免疫渗滤试验及斑点金免疫层析试验时，举例说明，斑点金免疫渗滤试验检测抗dsDNA抗体，斑点金免疫层析试验检测HbsAg、HCG。

D、讲述金标法的优势及劣势时，重点突出“金标法“为何有“床边检验”之称，金标法在临床中的应用优势，在临床中已开展的项目。

2．启发引导学生思维：

A、讲解金免疫技术前，先引导学生复习免疫技术及标记免疫技术的概念、特点，和前面的章节进行比较，使同学对本章节的内容有一个大概的认识

B、讲述斑点金免疫渗滤试验及斑点金免疫层析试验的各个类型原理时，引导学生依据检测的对象不同，该选用什么检测方法，推测检测方法该如何建立，试剂条每个部分包被的成分是什么，整个反应的流程及原理是怎样的。

3．采用英语专业词汇：

金免疫技术(colloidal gold immunoassay)

胶体金(colloidal gold)

免疫金(immunogold)

斑点金免疫渗滤试验（ dot immunogold filtration assay,DIGFA )

斑点金免疫层析试验 （ dot immunogold chromatographic assay,DICA )

4．指导学生自学：

金标技术的应用非常广泛，已应用于临床的很多领域。由于目前它还是定性分析，故主要用以检测正常体认中不存在的生物活性物质（如传染病的抗原及抗体)，以及正常情况下体液中含量很低而在某些疾病中升高的生物活性物质。随着技术的进展，对某些可确定诊断的、有正常上限值（cutoff)的生物活性物质也可进行检测。学生可以上网查找金标技术在临床检验中的应用的相关资料。

5．学科进展内容：

1978年，Geobegan等将胶体金标记抗体用于普通光镜下检测B淋巴细脑表面膜免疫球蛋白，建立了光镜水平的免疫金染色(Immunogold staining，IGS)。1981年Danscher用银显影方法增强金颗粒的可见度，并提高了灵敏度。1983年，Holgate等又加以改进，将免疫金染色与银显影技术相结合，称为免疫金银染色法(Immunogold silver staining，IGSS)。由于IGS和IGSS两种方法具有试剂制备简便，特异性强，灵敏度高，应用范围广，并可用于双重和多重标记等优点，被广泛应用于医学和细胞生物学研究领域，是目前免疫组织化学技术中较常用的敏感方法之一。近年来，胶体金标记技术进一步发展应用于免疫转印、流式细胞术(flow cytometry，FCM)、液相免疫测定、固相斑点金／银染色(dot IGS／IGSS)及斑点金免疫渗滤测定法(dot immunogold filtration assay，DIGFA)等多种标记免疫检测方法。

课堂提问设计：

1、  什么是免疫技术，什么是标记免疫技术？

2、  斑点免疫渗滤试验中的质控点如何设计？包被的是什么成分？

3、G区如果包被的是鼠源性的金标特异性抗体，则C区包被的是什么物质？医学招聘网

教师与学生互动的设计：

  请解各种反应类型的原理时，举例说明，引导学生依据检测对象的种类不同、反应类型的不同、试剂的不同来推理试验的原理。

教学方法与手段（采用何种直观教具和数量)(请打√)

板书设计√

挂图 投影 √   幻灯 录像 CAI课件√ 模型

其它：

课时具体安排：

大课讲授，共2学时，80分钟

教学改革措施（授课形式、课堂提问、思考题、复习提纲、测试题)

1、充分多媒体的优势，以动画的形式将胶体金的特性、各种试验的反应原理形象地表现出来，学生易于理解

2、密切联系临床，将临床上常用的检测项目融合到课堂讲授中，如斑点金免疫层析试验检测HbsAg，斑点金免疫渗滤试验检测抗dSDNA

3、启发性教学，适当地提问，引导学生推理检测的原理，加深印象

4、总结复习，开课前先与同学复习相关知识，使同学了解本章节与前几堂课的异同点，便于同学归纳知识点。课堂结束前，将本章节的重点内容再次强调，例如胶体金的特性，金免疫测定技术的分类等。

辅导的问题与难点：

  斑点金免疫层析试验间接法的原理：先动画图示操作的流程，再动画图示反应原理、结果的判断，采用反流免疫层析法的作用。

备课主要参考资料（图书、文献)：

1、免疫胶体金的制备及其在医学检验中的应用，周友泉

2、胶体金快速斑点结合免疫分析，刘宏伟 

3、免疫学和免疫学检验，陶义训

授课教师对此次授课的自我评价：

教学内容充实，时间安排合理，多媒体课件制备精美，理论结合实际，重点突出。

教学后记（随笔)：

随着免疫分析日益广泛应用于以临床为主以及非临床领域的诊断工业（diagnostic industry)，免疫分析向两个方向发展：一类为全自动化的免疫分析；另一类为以硝酸纤维膜为载体的快速免疫分析。前者需要价格昂贵的全自动www.med126.com/zhuyuan/仪器及与仪器严格配套的各种试剂盒，目前只能在医疗及检测中心应用，虽也能较快速给出结果，但仍需一定时间，不适合远离医疗及检测中心的地区，更不能用于“患者床旁检验”（real time clinical decision)和普查的需要，在酶免疫分析的基础上，主要以硝酸纤维素膜为载体的快速诊断方法迅速和广泛地发展起来，即快速斑点免疫结合分析（dot immunobinding assay, DIBA)。通过本章的学习，学生了解了金免疫技术的发展历史，掌握了胶体金的特性、胶体金和免疫金的制备要点，掌握了各种金免疫测定技术的原理，了解了金免疫技术的优势及其在临床中的应用。

学生评价：

教学内容充实，重点突出，密切联系临床实际

教研室主任评价：

教学内容充实，逻辑结构安排合理。教学深度适中，时间安排合理，理论板书和临床实例结合恰当，重点、难点突出，学生易掌握，达到了预期效果。

教案书写要求：文字通畅，书写工整或电脑打印。