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第2次课 授课时间：2006年 月 日
课程名称 | 年级 | 05级 | 专业、层次 | 临床医学等各专业本科 | ||||
授课教师 | 邬于川 | 职称 | 副教授 | 课型（大、小) | 小 | 学时 | 3 | |
授课题目 | 小吞噬实验（二)、自作溶菌酶实验 | |||||||
基本教材及主要参考书 | 医学免疫学实验指导 邬于川主编 泸州医学院印刷厂2002 P1~3 现代免疫学实验技术 沈关心、周汝麟主编 湖北科学技术出版社 1998 | |||||||
目的与要求： 掌握小吞噬实验的结果分析； 掌握溶菌酶实验的原理、方法及结果分析 | ||||||||
教学内容与时间安排： 一、自作小吞噬实验（二)---50min 二、溶菌酶实验--- 20min 三、设计性试验：检测可溶性抗原 方案设计 10min 教学方法：讲授、板书、示教 | ||||||||
教学重点及如何突出重点、难点及如何突破难点： 教学重点 小吞噬实验的结果分析；溶菌酶实验的原理及结果分析 教学难点 小吞噬实验的结果分析 提示：规范使用显微镜。转换视野，仔细观察镜下标本的形态及染色性，对照示教片，结合组织胚胎学中有关血细胞形态染色的知识正确识别中性粒细胞及被其吞噬的金黄色葡萄球菌。 | ||||||||
教研室审阅意见： 教研室主任签名： 年 月 日 | ||||||||
基本内容 | 教学手段 | 课堂设计和时间安排 |
板书提纲 一、自作小吞噬实验（二) （一)结果观察 （二)分析 中性粒细胞及葡萄球菌 100个中性粒细胞中吞噬细胞的中性粒细胞数 吞噬百分率= ───────────────×100% 100（中性粒细胞数) 100个中性粒细胞吞噬的细菌总数 吞噬指数= ───────────────── 100（中性粒细胞数)
二、溶菌酶实验 （一)原理 革兰阳性菌 β－1，4糖苷键 标准溶菌酶 （二)材料与方法 生理盐水 生理盐水 标准溶菌酶 唾液 标本1 泪液 标本2 图2-1溶菌酶实试验示意图 （三)结果 溶菌环 标准曲线 教学进程 分组 一 小吞噬实验（二) 【结果】 油镜下见中性粒细胞核呈深紫红色，分叶明显，胞浆呈淡红色，细菌被吞入胞浆，呈紫色。随机数100个中性粒细胞，分别计数吞噬有细菌的中性粒细胞数和所吞噬的细菌总数，按照下列公式，计算出吞噬百分率和吞噬指数。 100个中性粒细胞中吞噬细胞的中性粒细胞数 吞噬百分率= ───────────────×100% 100（中性粒细胞数) 100个中性粒细胞吞噬的细菌总数 吞噬指数= ───────────────── 100（中性粒细胞数) 【注意事项】 ⒈ 所用器材要洁净。 ⒉ 愈接近片子末梢细胞数愈多，计数时应取片子前、中、后三段计数，以提高准确性。 二 溶菌酶实验（溶菌酶的溶菌作用) 【原理】溶菌酶（lysozyme)主要由吞噬细胞合成并分泌的一种小分子蛋白质，属乙酰氨基多糖酶。它的等电点高（PH 11.0)，能与细菌牢固的结合，并裂解肽聚糖中N-乙酰葡糖胺和N-乙酰胞壁酸之间的β-1，4糖苷键，使细菌溶解死亡。革兰氏阴性菌肽聚糖层少，又有外膜保护，故在一般情况下不受溶菌酶的影响。 【意义】溶菌酶广泛分布于机体的组织、体液与分泌液，其中泪液含量最高，约血清的100~150倍。临床慢性支气管炎，局部免疫功能降低，唾液中溶菌酶低于正常，各种类型的白血病患者血清和尿中溶菌酶含量有所增加。 【材料】 ⒈ 唾液、泪液（或乳汁)、标准溶菌酶（1ng/ml)、生理盐水、2~5%琼脂盐水。 ⒉ 细球菌（M.lysodeikticus)。 ⒊ 毛细吸管、打孔器（或滤纸片)、无菌平皿等。 【方法】 ⒈ 取一无菌平皿，倾入5ml细球菌悬液，再倾入5ml已溶化的2.5%琼脂盐水,迅速混匀,平放待凝。 ⒉ 用打孔器按图2-1 所示打孔，挑去孔内琼脂，用毛细吸管分别加唾液、泪液（或乳汁)、标准的溶菌酶和生理盐水（或用无菌圆形滤纸片分别蘸取上述四种液体，按图2-1所示贴于平皿表面)。 ⒊ 37℃过夜，观察结果。 【结果】 孔周或滤纸片周围出现的透明圈即为溶菌环。注意比较溶菌环的大小。 【注意事项】 ⒈ 加样时，样品避免溢出孔外，孔内不应有气泡。 ⒉ 作定量检测时，先要用标准品制备标准曲线，然后根据环的直径及标准曲线求出样品含量。 ⒊ 标准曲线绘制后，每次检验样品时，最好在同一平皿上备有标准品的对照，以资比较。 方案设计：定量检测可溶性抗原 清洁 | 讲授 观察 计数/画图 ―――― ---板书、 讲授 ---操作 ―――― | 约20min ---约10min ---约30min ---约10min 共约50min ―――――― 约10执业医师min 约15min ―――――― 10min 约5min |
小 结 | 1、各种血细胞的特点 2、阳性结果确认 3、吞噬指数和吞噬百分率的计算 4、小吞噬实验意义 5、溶菌酶的作用原理 |
复 习 思执业药师 考 题 、 作 业 题 | 思考题 1、什么是吞噬指数和百分率？ 2、溶菌酶的溶菌作用有什么生物学意义？ |
下 次 课 预 习 要 点 | 一、凝集反应 二、酶联免疫吸附实验（ELISA) |
实 施 情 况 及 分 析 |
