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法医学-实验指导:实验四 有机磷农药的检验
来源:河北医科大学 更新:2013/10/11 字体:

实验四 有机磷农药的检验

 

【目的要求】

1.掌握有机磷农药的提取净化和检验方法。

2.掌握根据有机磷农药结构的特点进行定性分析。

【实验内容】

一、检材采取

如系口服中毒,可取呕吐物,胃内容,剩余饮食物,血液、肝脏等。

如系呼吸道吸人中毒,可取血液、肺、肝等。

如系皮肤,粘膜接触中毒的,应取接触部位的局部组织,血和肝脏。

二、检材的提取

取死者胃内容物2~5克,置乳钵中,少量多次地加人无水硫酸钠研磨至干沙状后,移于150ml碘量瓶中,加人二氯甲烷20ml,振荡浸提l0min,残渣再用二氯甲烷20ml 重复提取一次,过滤合并滤液,滤液于60℃水浴上浓缩至2毫升,或在K·D浓缩器上减压浓缩至2ml。

经上述方法提取的有机磷,如果杂质比较少,即可用于检验,如果杂质较多,则需进一步净化。

三、净化

取直径2厘米,长30厘米的层析柱一支,底部放一团脱脂棉,管内加人2厘米厚的无水硫酸钠,然后填人氧化铝混合吸附剂(活性炭2克,硅藻土4克,氧化铝4克混合而成)最上层再加无水硫酸钠2厘米,加满二氯甲烷后,打开下面水止,待二氯甲烷流至柱顶端水平时,将上面所提取的浓缩液5毫升加人,打开水止待流至柱顶端水平时,再用100毫升二氯甲烷淋洗(柱流出速度控制在5m1/分),收集二氯甲烷淋洗液置K·D浓缩器另一个蒸馏瓶中于60℃水浴上减压浓缩至10毫升,留作下面的试验用。

四、显色反应

(1)间苯二酚——氢氧化钠反应(灵敏度1~5微克)

敌百虫,敌敌畏和二溴磷水解后生成二氯乙醛,在碱性情况下与间苯二酚缩合生成红色化合物。

试剂:

5%间苯二酚乙醇溶液

5%氢氧化钠溶液

操作:

取检液一滴于滤纸上,稍干,加间苯二酚醇溶液和氢氧化钠溶液各1滴,在酒精灯上微烤片刻,如有敌百虫、敌敌畏或二溴磷,即显红色。

水合氯醛有同样作用,如将操作改在试管中进行,氢氧化钠溶液改用饱和碳酸钠溶液,则水合氯配合呈黄红色,敌百虫等仍为红色。

(2)偶氮色素反应(灵敏度1:500,000)

有机磷农药中的硝基苯基,经还原可变为苯胺基,苯胺基可经重氮化生成重氮盐,重氮盐再与酚或芳香胺类偶合生成偶氮色素,1605、甲基1605、杀螟松等均有作用。

试剂:

10%盐酸溶液

乙醇

0.25%亚硝酸钠溶液

2.5%氨基磺酸铵(或2.5%脲素)溶液

碱性乙萘酚溶液:0.5克乙萘酚溶于50毫升10%氢氧化钠中。

0.5%N萘基乙二胺盐酸盐溶液

操作

取检材提取的浓缩液约3-4滴于试管中,加乙醇液2~3毫升稀释,加锌粉0.1克。10%盐酸1毫升于水浴中加热使检液充分还原至基本上无色,取出放冷,用滴管吸取清液于另一试管中,加0.25%亚硝酸钠1~2滴,振摇,放置1~2分钟,再加2.5%氨基磺酸铵4~5滴,振摇,以除去过剩的亚硝酸,待无气泡发生后,将试www.med126.com/job/液分倒在二个小瓷皿中,分别加入乙萘酚和萘基乙二胺试剂数滴,如有1605等有机磷农药则分别显橙一红色或红一紫红色。

〔说明〕

1.本反应的关键一是要还原好,二是过剩的亚硝酸要除尽,尤其是用萘基乙二胺时,亚硝酸盐要除尽,否则空白也可能出现微弱的红紫色。

2.1605还原后的重氮盐与萘基乙二胺偶合,需在酸性溶液中进行,偶合时,如酸度不够,则可能导致阴性,此时,再加数滴10%盐酸即可。

P—S—

RO

RO

O(S)

(3)氢氧化钠——亚硝酰铁氰化钠反应


有机磷农药中凡有  结构的,在碱性水溶液中易水解生成硫

化物,与亚硝酰铁氰化钠作用,生成紫红色络合物。

Na2S+Na2〔Fe(CN)5NO〕→Na4〔Fe(CN)5NOS〕

试剂:

10%氢氧化钠

1%亚硝酰铁氰化钠溶液(新配)

操作:

取检材浓缩液3~4滴于试管中加入乙醇1~2毫升稀释,加蒸馏水1毫升,加10%氢氧化钠0.5毫升,在沸水浴中加热10分钟,取出放冷,滴加1%亚硝酰铁氰化钠溶液3~4滴,如有1059、3911、1240、4049、乐果等有机磷农药即显紫红色,但很快消失。

五、薄层层析法:

吸附剂:硅胶G或硅胶GF254

展开剂:

①  环己烷:氯仿=1:1

②  苯:醋酸乙酯=9:1

③  苯:石油醚:丙酮=7:2:1  

④  苯:环己烷=4:1 

⑤  环己烷:丙酮=4:1 

显色方法:

1.溴酚蓝—醋酸法(灵敏度1~5ug)

2.间苯二酚—氢氧化钠法(灵敏度1~5ug)

试剂:

1)溴酚蓝试剂:0.1g溴酚蓝溶于10ml 丙酮中,再用1%硝酸银丙酮水溶液(丙酮:水=1:3)稀释至l00ml

2)5%醋酸溶液

3)1%间苯二酚醇液

4)5%氢氧化钠溶液

操作及结果:

(一)含硫类有机磷农药的检验:

将检液及标准样品点于一薄层板上,同法点另一块薄层板,然后分别在两种展开剂中展开后,稍晾干,喷溴酚蓝至板上呈现均匀蓝色,置60℃烘箱中加热5~10分钟,再喷5%醋酸溶液至背景为浅黄色,含硫有机磷即呈蓝色斑,有机磷含量大时,斑点中心呈黄色,外圈呈蓝色,测定Rf值同标样比较即可判定为何种有机磷。

(二)非含硫类有机磷农药的检验:

将检液及标准DDVP标准液点于同一薄层板上,同法点另一块薄层板,然后分别在环己烷:氯仿(1:1)及苯:醋酸乙酯(9:1)两种展开剂中展开后稍晾干,即喷间苯二酚—氢氧化钠试剂稍加热。敌敌畏、敌百虫及二溴磷等有机磷农药显红色斑点,背景无色或污绿色,其他有机磷不显色,氯醛、水合氯醛同样显色。

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