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1、胚胎的采集与洗涤利用双通式或三通式导管冲卵器多次向子宫角注入冲卵液，反复冲洗回收
桑椹至胚期胚胎。2、加入冷冻液室温条件下，在加入1.4M/L
甘油的冷冻液中
脱水平衡20min。3、装管和标记将胚胎与冷冻液按前述方法装入0.25ml细管中，并在细管外标记供体牛号、胚胎数量、等级、冷冻日期等。4、冷冻和诱发结晶（植冰)将装入细管的胚胎放入冷冻仪中，在0℃平衡10min，以l℃/min的速度降至-6～-7℃，在此温度下诱发结晶，并平衡10min，然后以O.3℃/min的速度降温至-35～-38℃，投入液氮保存。5、解冻和脱除保护剂从液氮中取出装胚胎的细管，立即投入37℃水浴中，并轻轻摆动，1min后取出即完成解冻过程。然后用O.2～O.5M蔗糖
酪酸盐缓冲液（PBS)分两步或一步法脱除冷冻保护剂使胚胎复苏，最后移人PBS培养液中准备移植。
