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这是确诊的最可靠方法。在疾病急性期， 从分泌物、血、尿、滑液、脑脊液及骨髓中发现沙门菌可确定为全身 感染。剖检时，应从肝、脾、肺、肠系膜淋巴结和肠道取病料，接种 于普通培养基或麦康凯培养基上。但必须注意，培养结果阴性并不能 排除沙门菌感染的可能性，因为在其他细菌共存的条件下，很难培养 出沙门菌。为此，肠道及口腔所取材料应接种在选择性培养基或增菌 培养基（四硫磺酸盐增菌液、亚硒酸盐增菌液、氯化镁-孔雀绿增菌 液)，24小时后，再在选择性培养基（如SS琼脂、麦康凯琼脂等) 上传代。获得纯培养后，再进一步鉴定。
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