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养猪咨询:常见猪寄生虫病诊断方法
寄生虫病 更新:2017/3/12 字体:
常见猪寄生虫病诊断方法
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(一)粪便虫卵检查法1.直接涂片检查法 是简便和常用的方法,但检查时所用的粪便数量少,故检出率较低。本法是先在载玻片上滴一滴甘油与水的混合液,再用牙签或火柴棍挑起少量粪便加入其中,混匀,夹去较大的粪渣,最后使玻片上留有一层均匀的粪液,其浓度的要求是将此玻片放于书上,能通过粪便液膜模糊地看出其下的字为合适。在粪便上覆以盖玻片,置显微镜下检查。检查时应顺序地查遍盖玻片下所有部分。2.水洗沉淀法 取粪便5克,加清水100毫升以上,搅匀成粪液,通过40~60目铜筛过滤,滤液收集于烧杯中,静置沉淀20分钟,倾去上清液,保留沉渣,再加清水混匀,再沉淀,如此反复操作直到上层液体透明后,吸取沉渣检查。3.漂浮法 先往青霉素空瓶中加入适量饱和盐水,再往瓶内加入粪便1克,混匀,筛滤,滤液注入另一瓶中,补加饱和盐水溶液使瓶口充满,上覆以盖玻片,并使液面与盖玻片接触,其间不留气泡,直立20分钟后,取下盖玻片检查。此法适用于检查比重比饱盐水溶液轻的虫卵,如一般线虫卵和球虫卵囊等。(二)常见虫卵的一般特征1.猪蛔虫卵 虫卵短椭圆,棕黄色,大小为56~87微米×46~57微米,壳厚,外表有凹凸不平的蛋白质膜,刚排出的虫卵含一未分裂的卵黄细胞,未受精卵呈现长椭圆形,壳较薄。2.结节线虫卵 椭圆形,淡灰色,卵壳薄而光滑,内含8~16个球形的胚细胞。大小为45~55微米×26~36微米。3.猪鞭虫卵 呈淡褐色,具有厚而光滑的外膜,两极呈栓塞状,形如腰臌,内有一胚细胞。虫卵大小为52~61微米×27~30微米。4.兰氏类圆线虫卵 呈椭圆形,淡灰色,卵壳薄而光滑,卵内含有成形的幼虫,幼虫呈U字形。大小为45~55微米×26~30微米。5.布氏片虫卵 呈淡黄色,卵壳薄,其一端有不明显的卵盖,卵黄均匀地散布于卵壳内。大小为130~140微米×80~85微米。6.球虫卵囊 呈卵园或椭圆形,淡灰色,壳薄而光滑,内有颗粒状的原生质团块。其大小因种类不同而不同,大的为24.6~31.9微米×23.2~24.0微米,小的为11.2~16.0微米×9.6~12.8微米。(三)猪疥螨的实验室检查方法1.病料的采取疥螨寄生于猪的皮内,因此应刮取皮屑,置于显微镜下,寻找虫体。刮取皮屑的方法很重要,应选择患病皮肤与健康皮肤交界处,这里的螨较多,往往在耳壳内容易寻找。先在要刮取的皮肤处滴加少许50%的甘油水溶液,然后用将边缘磨锐的不锈钢小勺耒刮取皮屑,直到皮肤轻微出血。将刮下的皮屑置入试管或塑料袋内,带回供检查。2.检查方法(1)显微镜下直接检查法 将刮下的皮屑置载玻片上,加入少量50%甘油水溶液,覆以另一张载玻片。搓压载玻片使病料散开,分开载玻片,置显微镜下检查。此法适合于检查皮屑中虫体较多的病料。(2)虫体浓集法 为了在较多的病料中,检出其中较少的虫体,提高检出率,可采用浓集法。此法先取较多的病料,置于试管中,加入10%NaOH溶液,在洒精灯上煮沸数分钟,使皮屑溶解,虫体自皮屑中分离出来。然后其自然沉淀或以每分钟2 000转/分钟的速度离心20分钟,吸取沉渣镜检。(四)猪附红细胞体的实验室检查方法可用来作为诊断的最重要的临床症状是:贫血,对外界反应迟钝,发热高达40℃或更高。其它示病症状是:耳廓边缘变色,皮肤变态反应。查找病原是确认该病的主要方法,新鲜血液加等量生理盐水稀释后置显微镜下观察,可见虫体呈球形,逗点形,杆状或颗粒状。由于虫体附着在红细胞表面有张力作用,红细胞在视野内上下震动或左右运动,红细胞形态也发生了变化,呈菠萝状、锯齿状、星状等不规则形状。血液姬姆萨染色后,虫体可染成紫红色,但该种染色方法的缺点是姬姆萨色素沉着,容易形成假像。血清经吖啶橙染色在荧光显微镜下可见各种形状的附红细胞体单体。但这一技术的复杂性使其只适宜实验室诊断。该染色情况下,附红细胞体呈浅至深桔黄色。血清诊断方法包括IHA试验、补体结合试验或ELISA方法,但抗体的产生与病原数量的增多(而不是与感染发生的时间)有暂时的相关性。这意味着抗体的产生呈波浪形。即使数次急性发作后,抗体滴度也只能在2-3个月内维持较高水平,之后便会下降到阈值以下,这表明假阴性是常见的。所有血清学方法只适合于群体诊断。PCR诊断已经成功地用于猪附红细胞体病。不过,该方法不能区别带虫猪和发病猪。动物试验也是确认猪附红细胞体病的方法之一。常用的试验动物是小白鼠,用小猪作试验动物时则需摘除脾脏。怀疑为猪附红细胞体病的猪在切除脾脏后观察3-20天,若是带虫猪则会出现急性附红细胞体的症状,此时可通过查找血涂片中的虫体进行猪寄生虫病诊断猪附红细胞体病的诊断方法猪附红细胞体病的诊断方法主要有以下几种:1、悬滴法新鲜血液加等量生理盐水稀释后吸取数滴置载玻片上,加盖盖玻片,置显微镜下观察,可见虫体呈球形,逗点形,杆状或颗粒状。由于虫体附着在红细胞表面有张力作用,红细胞在视野内上下震动或左右运动,红细胞形态也发生了变化,呈菠萝状、锯齿状、星状等不规则形状。该方法也适用于抗凝血液。抗凝血液存放1-2天一般并不影响检测结果。2、直接涂片法取新鲜或抗凝血少许置载玻片上推成薄层,然后在显微镜下直接观察。可看到附红细胞体呈球形,逗点形,杆状或颗粒状。寄生有附红细胞体的红细胞呈菠萝状、锯齿状、星状等不规则形状。该方法的优点是简单、快速。不足之处一是对推片的技术有一定要求,红细胞必需推成薄层;二是容易和其他导致红细胞变形的情况混淆。3、染色检查血液涂片经姬姆萨染色后,虫体可染成紫红色,但该种染色方法的缺点是姬姆萨色素沉着,容易形成假像。血清经吖啶橙染色在荧光显微镜下可见各种形状的附红细胞体单体。但这一技术的复杂性使其只适宜实验室诊断。该染色情况下,附红细胞体呈浅至深桔黄色。4、血清学诊断包括IHA试验、补体结合试验或ELISA方法,但抗体的产生与病原数量的增多(而不是与感染发生的时间)有暂时的相关性。这意味着抗体的产生呈波浪形。即使数次急性发作后,抗体滴度也只能在2-3个月内维持较高水平,之后便会下降到阈值以下,这表明假阴性是常见的。所有血清学方法只适合于群体诊断。5、PCR诊断国外已有PCR技术用于猪附红细胞体病诊断的报道。不过,该方法不能区分带虫猪和发病猪。6、动物试验常用的试验动物是小白鼠,用小猪作试验动物时则需摘除脾脏。怀疑为猪附红细胞体病的猪在切除脾脏后观察3-20天,若是带虫猪则会出现急性附红细胞体的症状,此时可通过查找血涂片中的虫体进行诊断。
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实验室检测诊断
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实验室检查确诊
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