鸡免疫酶技术的操作是怎样的
-----
① NCM的处理：在NCM上划6毫米X6毫米的方格，然后 在方格中央用直径5毫米的圆形打孔器在膜平滑面按顺序压痕 迹，作为点样部位，将NCM置于蒸馏水中浸泡，完全湿透后， 取出、晾干后备用。② 点样：取2微升JOV抗原液滴于圆圈内，自儒干燥。③ 封闭：将NCM置于封闭液（0.01摩尔/升pH 7.2 PBS加 人10%小
牛血清)中，37 C下作用1小时，取出后用洗涤液 (0.01摩尔/升PH7.2PBS加人0.05%吐温-20)漂洗4次，每 次3分钟。④ 将待检血清做系列稀释，分别为1:10、1:50、1:200、1: 400、1:800、1:1600、1:3200、、1:6400、1:12800、1:25 600,同时做阴性和阳性血清对照，将上述血清加到NCM上的点样部 位、置湿盒中37 t下作用1.5小时，同上洗涤。⑤ 将NCM置于稀释到工作浓度的酶标
兔抗鸡Ig G液中， 37 C下作用1小时，同上洗涤。⑥ 显色：将NCM侵人底物溶液中，闭光作用10分钟。⑦ 终止显色?.将NCM置于蒸馏水中浸泡3分钟，自然干 燥〇⑧ 结果判定：压迹中间呈现棕色斑点者判定为阳性（ + ), 与阴性对照相同不呈现斑点者判定为阴性（-)。以出现阳性反 应的血清最高稀释度为该血清的DOT-ELISA效价。
