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养猪疾病问答:狂犬病的实验室诊断有哪些?
病毒病 更新:2017/6/1 字体:
狂犬病的实验室诊断有哪些?

感谢大夫为我快速解答——该如何治疗和防治


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1?直接染色法剖检病犬取大小脑、延脑等,最好取海马回,各切取lcm3小块,置灭菌容器,在冷藏条件下运送至实验室。若检查内基氏小体,可切取海马回,置吸水纸上,切面向上,载玻片轻压切面,制成压印标本,室温自然干燥后染色镜检,检查有无特异包涵体。内基氏小体位于神经细胞胞浆内,直径3?20fxm不等,呈椭圆形,呈嗜酸性着染(鲜红色),检出内基氏体,即可诊断为狂犬病。犬脑的阳性检出率为70%左右,在检查犬脑时还应注意与犬瘟热病毒引起的包涵体相区别。荧光抗体法也是一种特异而快速的直接染色检查诊断法。将本病高免血清用荧光色素标记,制成荧光抗体。取可疑病例脑组织或唾液腺制成压印片或冰冻切片,用荧光抗体染色,在荧光显微镜下观察,胞浆内出现亮绿色荧光颗粒者为阳性。该方法用于动物脑组织阳性检出率很高,可达95%,是狂犬病的一种较好的诊断方法。2.病毒分离取患病动物的脑或唾液腺等材料并用缓冲盐水或含10%灭活豚鼠血清的生理盐水研磨成乳剂,脑内接种5?7日龄乳鼠,每只注射0.03mL。接种后继续由母鼠同窝哺养,3?4天后如发现母鼠哺乳力减弱、痉挛、麻痹死亡,即可取其脑组织检查包涵体,并制成抗原,做病毒鉴定。如经7天仍不发病,可杀死其中2只,剖取鼠脑做成悬液,如上传代。如第二代仍不发病,可再传代。连续传三代,观察4周而仍不发病者可判作阴性。也可应用3周龄以内的幼鼠,如上做脑内接种,每只0.03mL。如有条件,可同时接种仓鼠肾原代细胞或仓鼠肾继代细胞和BHK-21细胞等。新分离的病毒可用电子显微镜直接观察,或者应用抗狂犬病特异免疫血清进行中和试验或血凝抑制试验加以鉴定。3.血清学检验常用的血清学方法主要有中和试验、补体结合试验、间接荧光抗体试验、交叉保护试验、血凝抑制试验以及间接免疫酶试验等。一般实验室常用的血清学诊断法为中和试验。近年来已将单克隆抗体技术用于狂犬病的诊断,特别适用于区别狂犬病病毒与该病毒属的其他相关病毒。此外,还有斑点免疫测定、核酸杂交技术、PCR技术、对流免疫电泳、Western印迹等新型诊断方法。
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