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鸡病怎么治疗方法:鸡病的实验室诊断-病料的涂片、染色和镜检
鸡病防治 更新:2018/2/5 字体:

  这是检查细菌性疾病常用的方法,也可对球虫病和其它寄生虫病作出诊断。
  1.涂片镜检
  用病料涂片,不经染色,直接镜检,可用于曲霉菌病、球虫病和其它寄生虫病的诊断。诊断曲霉菌病时,直接取肺和气囊上的结节,置载玻片上,用另一载玻片将结节压碎后,抹片,可以直接在低倍镜下观察有无菌丝和孢子;诊断球虫病时,刮取带血的肠内容物少许置载玻片上,涂一薄层,加一滴干净水于低倍镜下观察有无卵囊和裂殖体;诊断隐孢子虫病时,可以直接取呼吸道、法氏囊等内容物抹片,镜检可见到大量的隐孢子虫体。
  2.涂片染色镜检
  通过用病料涂片、染色和镜检,可以对细菌性疾病作出初步诊断,如鸡霍乱葡萄球菌病等。用消毒过的剪刀取一小块病理组织,在洁净的载玻片上轻触一下,制成触片或轻抹一下制成抹片,凉干后,在酒精灯火焰上来回通过3~4次,进行固定,然后再经美蓝或瑞氏染液,在油镜下观察。如见到大量两极浓染的短杆菌,则为鸡霍乱;如见到大量成堆的球菌,则为葡萄球菌病。
  3.常用的染色方法及染液配制
  常用的细菌染色方法主要有两种类型,一是简单染色法,只应用一种染料进行染色的方法,如美蓝染色法;二是复染色法,应用两种或两种以上的染料或再加媒染剂进行染色的方法。染色时,有些是将染料分别先后使用,有些则同时混合使用,染色后不同的细菌和物体,或者细菌构造的不同部分可以呈现不同的颜色,有鉴别细菌的作用,又可称为鉴别染色,如革兰氏染色法、抗酸性染色法、瑞特氏染色法和姬姆萨染色法等。
  (1)美蓝染色法
  在干燥、固定好的抹片上,滴加适量的美蓝染色液,以足够覆盖涂抹点为好,经1~2分钟,水洗,用吸水纸吸干或自然干燥,但不能烤干,镜检。
  碱性美蓝(亦称骆氏美蓝)染色液的配制:美蓝1.48克溶于100毫升95%酒精中制成美蓝饱和酒精溶液,取其30毫升,加入0.01%氢氧化钾水溶液100毫升,混合即成。此染色液密闭保存,可多年不坏。
  (2)革兰氏染色法
  在已干燥、固定好的抹片上,滴加草酸铵结晶紫染色液,经1~2分钟,水洗;加革兰氏碘溶液于抹片上媒染,作用1~3分钟,水洗;加95%酒精于抹片上脱色,约30~60秒,水洗,加稀释石炭酸复红(或沙黄水溶液)复染10~30秒,水洗;吸干或自然干燥,镜检。革兰氏阳性菌呈蓝紫色,革兰氏阴性菌呈红色。
  草酸铵结晶紫(亦称赫克氏结晶紫)染色液的配制:结晶紫13.87克溶于100毫升95%酒精中制成结晶紫饱和酒精溶液,取其2毫升,加蒸馏水18毫升稀释10倍,再加入1%草酸铵水溶液80毫升,混合过滤即成。
  革兰氏碘溶液的配制:将碘化钾2克置乳钵中,加蒸馏水约5毫升,使之完全溶解,再加入碘片1克,予以研磨,并徐徐加水,至完全溶解,然后注入瓶中,补加蒸馏水至全量为300毫升即成。此液可保存半年以上,当产生沉淀或褪色后即不能再用。
  沙黄水溶液的配制:沙黄3.41克溶于100毫升95%酒精中制成沙黄饱和酒精溶液,将其用蒸馏水稀释10倍即成。此液保存期以不超过4个月为宜。
  石炭酸复红染色液的配制:取3%复红酒精溶液10毫升,加入5%石炭酸水溶液90毫升,混合过滤即成。
  (3)抗酸性染色法
  萋-尼(Ziehl—Neelsen)氏抗酸性染色法:首先在已干燥、固定好的抹片上,滴加较多量的石炭酸复红染色液,在玻片下以酒精灯火焰微微加热至发生蒸气为度(不要煮沸),微微发生蒸气持续3~5分钟,水洗。然后用3%盐酸酒精(加浓盐酸3毫升于95%酒精97毫升中即成)脱色,至标本五色脱出为止,充分水洗。再用碱性美蓝染液复染约1分钟,水洗。最后吸干,镜检,抗酸性细菌呈红色,非抗酸性细菌呈蓝色。
  抗酸性染色法之二:在固定后的抹片上滴加金永(Kinyoun)氏石炭酸复红液,染3分钟。然后连续水洗90秒,再滴加加鲍脱(Gabbott)氏复染液复染1分钟。连续水洗1分钟,吸干,镜检。抗酸性菌呈红色,其它菌呈蓝色。①金永氏石炭酸复红液的配制:将碱性复红4克溶于95%乙醇20毫升中,缓缓加入蒸馏水100毫升并振摇,再加入石炭酸(化学纯)9毫升,混合;②加鲍脱氏复染液的配制:先将美蓝1克溶于无水乙醇20毫升中,加蒸馏水50毫升,再加浓硫酸20毫升即成。
  抗酸性染色法之三:滴加石炭酸复红液于已干燥固定好的抹片上,染色1分钟,水洗。再滴加1%美蓝酒精溶液复染20秒,水洗,干燥,镜检。抗酸性菌呈红色。
www.med126.com/shouyi/tu/wenda/  镜检前对光检查染色片,标本务必全呈蓝色,如标本呈红色或棕色表明复染不足,应再做复染5~10秒钟,再观察,如仍未全呈蓝色时,仍可反复复染,至符合要求为止。
  (4)瑞特氏染色法
  方法一:抹片自然干燥,然后在标本上滴加瑞特氏染色液,为了避免很快变干,可稍多加些染色液,或者视情况补充滴加;经1~3分钟,再加约与染液等量的中性蒸馏水或缓冲液,轻轻晃动玻片,使之与染液混匀经5分钟左右,直接用水冲洗(不可先将染液倾去),吸干或烘干,镜检。细菌染成蓝色,组织、细胞等物呈其它颜色。
  方法二:抹片自然干燥,然后按涂抹点大小盖上一块略大的清洁纸片,在其上轻轻滴加染色液,至略浸过滤纸,并看情况补滴,保持不变干,染色3~5分钟;其后直接用水冲洗,吸干或烘干,镜检。此法所用染色液经滤纸过滤,可大大避免沉渣黏附于抹片上而影响镜检观察。
  瑞特氏染色液的配制:取瑞特氏染料0.1克置玛瑙乳钵中,徐徐加入甲醇,研磨以促其溶解;将溶液倒人有色中性玻璃瓶,并数次以甲醇洗涤乳钵,亦倒入瓶中,最后使全量为60毫升即可;后置暗处过夜,次日过滤即成。此染色液须置于暗处,其保存期约为数月。
  (5)姬姆萨氏染色法
  在5毫升新煮过的中性蒸馏水中滴加5~10滴姬姆萨染色液原液,即稀释成为常用的姬姆萨染色液;抹片经甲醇固定并干燥后,在其上滴加足量染色液或将抹片浸入盛有染色液的染色缸中,染色30分钟,或者染色数小时至24小时,取出水洗,吸干或烘干,镜检。细菌呈蓝青色,组织、细胞等呈其它颜色,视野常呈红色。
  姬姆萨染色液的配制:取姬姆萨染料0.6克于50毫升的甘油中,置55~60℃水浴中1.5~2小时,然后加入甲醇50毫升,静置1天以上,过滤即成,作为姬姆萨染色液原液贮存。
  染色前,于每毫升蒸馏水中加入上述原液1滴,即成姬姆萨氏染色液。应当注意,所用蒸馏水必须为中性或微碱性,若蒸馏水偏酸,可于每10毫升左右的蒸馏水加入1%碳酸钾溶液1滴,使其变成微碱性。


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