分光光度法
第一节 紫外—可见分光光度法
一、基本原理
紫外—可见吸收光谱属分子吸收光谱，是由分子的外层价电子跃迁产生的。
Lambert-Beer定律 A＝ECL
A为吸收度，E为吸收系数，C为被测物质溶液浓度，L为光路长度。吸收系数E是物质的物理常数，随浓度C单位的不同有不同表示方法。
药品检验中使用百分吸收系数 ，物理意义是当吸光物质溶液浓度为1%(1g/100 ml)，液层厚度为1cm时的吸收度。医 学全,在线.搜集.整理www.med126.com
二、可见－紫外分光光度计
光源－单色器－吸收池－检测器－数据记录和处理
1.光源：紫外区采用氢灯或氘灯，可见光区采用钨灯
2.单色器：狭缝宽度大，单色光纯度差；宽度过小，检测灵敏度降低
3.吸收池：玻璃池适用于370nm以上的可见光区，石英池适用于紫外、可见光区，通常仅在紫外光区使用
三、吸收度的测定方法
1.对溶剂的要求：能充分溶解样品，与样品无相互作用，挥发性小，在测定波长处的吸收应符合要求
2.空白对照实验：将溶剂装入参比池，调节吸收度为0，去除溶剂和容器吸收、光散射、反射的影响。
3.测定波长确证
4.供试品溶液浓度：使吸收度在0.3～0.7范围内。
5.狭缝宽度：以减少狭缝宽度时，供试品溶液吸收度不再增加为准。
五、应用
1.鉴别
(1) 对比吸收光谱特征参数：核对供试品溶液λmax、、A是否符合规定。可同时用几个峰位作为鉴别依据
(2) 比较吸收度比值一致性：吸收峰较多时，规定几个波长处吸收度比值作为鉴定标准
(3) 对比吸收光谱一致性
2.杂质检查
药物在紫外-可见光区有明显吸收，而杂质吸收弱；或杂质有明显吸收而药物无吸收，可通过控制吸收度限度来控制杂质量。
3.含量测定
(1) 对照品比较法：供试品溶液和对照品溶液浓度及测定条件应尽可能一致
(2) 吸收系数法：需对仪器进行严格校正和检定
(3) 计算分光光度法：通过数学处理消除样品中干扰组分的干扰
(4) 比色法：供试品与对照品同时操作医,学.全,在.线www.med126.com
第二节 荧光分析法
一、基本原理
荧光的产生：此化学物质能从外界吸收并储存能量（如光能、化学能等)而进入激发态，当其从激发态再回复到基态时，过剩的能量可以电磁辐射的形式放射（即发光)。荧光发射的特点是：可产生荧光的分子或原子在接受能量后即刻引起发光；而一旦停止供能，发光（荧光)现象也随之在瞬间内消失。
发射荧光的光量子数亦即荧光强度，除受激发光强度影响外，也与激发光的波长有关。各个荧光分子有其特定的吸收光谱和发射光谱（荧光光谱)，即在某一特定波长处有最大吸收峰和最大发射峰。选择激发光波长量接近于荧光分子的最大吸收峰
物质的激发光谱和荧光发射光谱，可以用作该物质的定性分析。当激发光强度、波长、所用溶剂及温度等条件固定时，物质在一定浓度范围内，其发射光强度与溶液中该物质的浓度成正比关系，可以用作定量分析。荧光分析法的灵敏度一般较紫外分光光度法或比色法为高，浓度太大的溶液会有“自熄灭”作用，故荧光分析法应在低浓度溶液中进行。
二、荧光分光光度计
激发光源→激发光单色器→样品池
↓
发射光单色器→检测器→数据记录处理
样品池用低荧光材料制成，四面透光，发射光方向与激发光成直角。
三、应用
荧光分析可用于鉴别和含量测定。一般采用对照品比较法测定含量，灵敏度高、选择性好，但干扰多、线性范围窄，多用于需要高灵敏度和允许较大变异性的样品分析。
第三节 红外分光光度法
一、基本原理
红外光谱是由分子的振动、转动能极引起的光谱。当用一定频率的红外光照射某物质分子时，若该物质的分子中某基团的振动频率与它相同，则此物质就能吸收这种红外光，使分子由振动基态跃迁到激发态。
因此，若用不同频率的红外光依次通过测定分子时，就会出现不同强弱的吸收现象。用Ｔ％－λ作图就得到其红外光吸收光谱。www.med126.com红外光谱具有很高的特征性，每种化合物都具有特征的红外光谱。用它可进行物质的结构分析和定量测定。
二、红外光谱仪
光源－吸收池－单色器－检测器－数据记录和处理
三、红外光谱与物质结构的关系
一般将振动形式分成两类：伸缩振动和变形振动。
（1)伸缩振动
表示。n原子沿键轴方向伸缩，键长发生变化而键角不变的振动称为伸缩振动，用符号ν
（2)变形振动（又称弯曲振动或变角振动)
基团键角发生周期变化而键长不变的振动称为变形振动，面内变形振动又分为剪式（以δ表示)和平面摇摆振动。
红外光谱区可分成4000 cm-1 ~1300cm-1和1300 cm-1 ~ 400 cm-1两个区域。最有分析价值的基团频率在4000 cm-1 ~ 1300 cm-1 之间，这一区域称为基团频率区、官能团区或特征区。区内的峰是由伸缩振动产生的吸收带，比较稀疏，容易辨认，常用于鉴定官能团。
四、应用
1鉴别：红外光谱特征性强，鉴别时按《药品红外光谱集》中收载的制备方法制备，与该品种对照图谱比较应一致。www.med126.com
2.检查：依据药物与其同质异晶杂质在特定波数的吸收有显著差异，对无效或低效晶型进行检查
