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无菌动物
来源:医学全在线 更新:2007/12/2 字体:

 

  (二)无菌动物的饲育装置

  无菌动物必须在与自然界微生物完全隔绝的无菌隔离器内饲育。旧式的无菌隔离器是用不锈钢等金属材料制成的,内部用高压蒸气消毒,由于成本高、操作不方便,现在已被塑料无菌隔离器所取代。塑料隔离器是用硬透明塑料制成的,内部用过氧乙酸等消毒液喷雾消毒,由于成本低、便于观察、操作方便,目前已被广泛采用。我国生产的塑料隔离器最近在中国医学科学院实验动物中心已通过鉴定,并已成批生产。

  无菌隔离器必须具备下面五个条件:

  1.必须是一个对微生物密闭的容器,其内部空间和内容物能接受高压蒸气或化学药品灭菌处理。

  2.隔离器的空间以及内容可随时被观察。

  3.隔离器内部应随时在视野下从外部进行工作,但不破坏内部的无菌环境。

  4.必须装置一个有内外门的无菌通道,动物或食物以及其它物品可以从外部无菌地输送到隔离器内部去,而不被坏内部的无菌环境,送出时亦然。

  5.必须装置一个无菌进行出气系统,内部保持适度的高气压。

  塑料无菌隔离器的结构模式见图6-1。

图6-1 塑料无菌隔离器

  其形态大小因应用的目的和动物的品种、数量而异,一般大小为1.80米×0.65米×0.5米,但是结构原理基本相同。大体上分为收容间、缓冲间和空气交换装置三部分。收容间有一个消毒药液的喷雾孔(a)和一付密封在塑料板上的橡胶手套(b),内部各种操作都要通过手套进行。手套是活动的,可以更换,为延长手套使用期限,手套外面加布手套。缓冲间(c)有两个开口和一个喷雾消毒药液的孔(d),动物、饲料、饮水和各种用具都通过缓冲间出入,两个开口要交互打开,以防空气污染收容间。空气交换装置由空气过滤器(e)和排气阀(f)两部分构成,排气阀能阻止空气逆流,以防污染。内部的气压应比外部略高,以利于换气。
六、无菌动物的检查

  为了确认无菌动物的无菌状态,及时发现污染,必须定其进行检查。检查材料以粪便为主,也可检查饲料、饮水和铺垫物等,或用消毒棉花擦拭隔离器内面或对动物饮食器皿表面进行培养。培养基可用牛肉浸液、硫乙醇酸盐培养基、血液琼脂、马铃薯琼脂或沙保弱氏琼脂等,分别在20℃、37℃、55℃作好气和厌气性培养。同时还要进行呼吸道支原体的检查和各种寄生虫检查,对于病毒,不可能一一进行分离培养,一般是通过临床观察、细胞培养或病理组织学检查作判定。
七、无菌动物在生物医学研究中的应用

  无菌动物并不等于普通实验动物除去了微生物。人工培育的无菌动物适应了无菌生活,所以在形态、生理、代谢及机体防御等方面都具有一定的特点。由于在这种动物的机体中排除了各种微生物的干扰,就可以对其它科研问题的实验,得出较明确的结果。另外,如将单一已知微生物接种到无菌动物体内,就可以研究机体和单一纯微生物的相互关系。

  无菌动物在生物医学研究中因具有独特作用,因此多年来在医学科学研究的很多方面已被广泛应用。在医学科学研究的各专门领域里,应用无菌运物进行实验研究的项目主要有:

  (一)在微生物学研究中的应用

  1.研究某些疾病的病原:无菌动物可提供组织培养的无菌组织;可提供具有某一种菌的已知菌动物;也可研究病原体的致病作用与机体本身在内的关系,如猫瘟病毒,正常猫易感染,无菌则不易受感,说明感染受肠道微生物的影响。

  2.研究微生物间的拮抗作用:菌群之间的拮抗作用是生物屏障的一种。生物屏障可能比物理屏障更有效。生物屏障原理为生物间的拮抗作用。如利用无菌动物来研究那种菌可拮抗假单孢菌,对放射研究甚为重要,因照射后常出现此菌。又如在把无菌动物放入spf环境前,先分别给无菌动物喂以大肠杆菌、乳酸杆菌、链球菌、白色葡萄球菌、梭状芽孢杆菌等五种菌群,再观察这些菌群间的拮抗作用。

  3.研究病毒病:无菌动物是研究病毒病、病毒性质、纯病毒、安全疫苗和单一特异性抗血清的有用工具。

  4.研究细菌学:尤其是肠道正常菌丛细胞间的相互拮抗性及细胞和宿主间的关系的研究。

  ⑴霍毛弧菌:口服霍乱弧菌使无菌幼豚鼠单菌感染时,就可使其死亡;但当使该动物同时感染产气荚膜(梭状芽胞)杆菌时,就可以除去霍乱弧菌,动物可以不发生死亡。

  ⑵福氏痢疾杆菌:将福氏痢疾杆菌单菌经口感染无菌幼豚鼠时,可以引起无菌豚鼠死亡。但在感染痢疾杆菌以前先经口接种活的大肠杆菌,就可以保护无菌豚鼠不致死亡,以后从肠道里只能检出在肠杆菌,而没有痢疾杆菌。 5.研究真菌感染:临床上由于较长期应用某些抗菌素,而有导致发生条件性真菌感染的现象,利用无菌动物实验,得到了一定的阐明。将白色念球菌经口接种给无菌雏鸡时,产生较多的菌丝体,并侵入肠道粘膜,但接种到普通雏鸡时,只观察到酵母型菌体,很少发病。将大肠杆菌接种到无菌雏鸡后,就能完全保护雏鸡不受侵犯。营养对保护机体受真菌感染也是重要因素,用无菌小白鼠实验也得到了类似的情况。 6.研究原虫感染:将溶组织阿米巴接种到无菌豚鼠的盲肠内不能引起感染。在普通对照组豚鼠中却能引起致死性感染。

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