微 信
题 库
搜 索
精品课程
热门课程
外科
妇产科
儿科
>
内科学
生理学
更多
药学专业
药理学
中药学
药物化学
生药学
卫生毒理学
更多
中医专业
中医基础理论
中医学
更多
口腔专业
口腔内科
口腔外科
更多
医学全在线
>
精品课程
>
卫生毒理学
>
南华大学
> 正文
卫生毒理学-实验指导:实验四 小鼠精子畸形试验
来源:南华大学资源网 更新:2013/9/10 字体:
大
小
◎
<一 目的>
◎
<二 原理>
◎
<三 仪器及试剂>
◎
<四 实验步骤>
◎
<五 统计方法及结果判定>
※<一 目的>
掌握小鼠精子畸形试验的基本技术
返回顶部
※<二 原理>
小鼠精子畸形受基因控制,具有高度遗传性,许多常染色体及X、Y性染色体基因直接或间接地决定精子形态。精子的畸形主要是指形态的异常,已知精子的畸形是决定精子形成的基因发生突变的结果。因此形态的改变提示有关基因及其蛋白质产物的改变。小鼠精子畸形试验可检测环境因子对精子生成、发育的影响,而且对已知的生殖细胞致突变物有高度敏感性,故本试验可用作检测环境因子在体内对生殖细胞的致突变作用。
返回顶部
※<三 仪器及试剂>
全部试剂除注明外,均为分析纯,试验用水为蒸馏水。
3.1 实验室常用设备。
3.2 生物显微镜。
3.3 甲醇。
3.4 1%~2%伊红染色液:称取伊红1~2g,溶于100mL蒸馏水备用。
返回顶部
※<四 实验步骤>
4.1 动物
6~8周龄(体重25~35g)。
4.2 剂量分组
设一个阴性对照(溶剂)组,一个阳性对照组及三个试验组,每组至少有5只存活动物。阳性物可采用环磷酸胺40~60mg/(kg·d)或甲基磺酸甲酯(MMS)50mg/(kg·d),
丝裂霉素
C(MMC)1.0~1.5mg/(kg·d)。最高剂量可取最大耐受量,或分别取1/2、1/4和1/8LD
50
作为剂量组。经口给予,连续5d。
4.3 操作步骤
4.3.1 动物处死时间:各种
会计资格
致突变物作用于精子的不同发育阶段,可在接触某种致突变物后不同时间出现精子畸形,故有条件时,可给于受试物后第一、四、十周处死动物,检查精子形态。因为大部分化学致突变物对精原细胞后期或初级精母
www.med126.com/hushi/
细胞早期的生殖细胞较为敏感,故一般均是于首次给受试物后的第35d处死。
4.3.2 用颈椎脱臼法处死小鼠,取出二侧副睾,放入盛有适量生理盐水(1mL)的小烧杯中或放入盛有2mL生理盐水的平皿中。用眼科剪将副睾纵向剪1~2刀,静止3~5min,轻轻摇动。用四层擦镜纸或合成纤维血网袋过滤,吸滤液涂片。空气干燥后,用甲醇固定5min以上干燥。用1%~2%伊红染色1h,用水轻冲,干燥。
4.3.3 镜检:在低倍镜下(用绿色滤光片)找到背景清晰精子重叠较少的部位,用高倍镜顺序检查精子形态,计数结构完整精子。精子有头无尾(轮廓不清)或头部与其他精子或碎片重叠,或明显是人为剪碎者,均不计算,每只动物至少检查1000个精子。
精子畸形,主要表现在头部,其次为尾部,畸形类型可分为无钩、
香蕉
形、胖头、无定形、尾折叠、双头、双尾等。异常精子均应记录显微镜的坐标数,以备查询。并分别记录异常类型,以便统计精子畸形率及精子畸形类型的构成比。
判断双头、双尾畸形时,要注意与二条精子的部分重叠相鉴别,判断无定形时要与人为剪碎及折叠相鉴别。
返回顶部
※<五 统计方法及结果判定>
每个剂量组应分别与相应的阴性对照组进行参数统计方法比较,如用Wilcoson秩和检验法评价精子畸形阳性的标准是,畸形率至少为阴性对照组的倍量或经统计有显著意义,并有剂量反应关系。
一般阴性对照组的精子异常率为0.8%~3.4%,供参考。但应有本实验室所用实验动物的自发畸形率作参考。
返回顶部
相关文章
妇产科学习题集:正常产褥
内科学图片库:肠、腹膜结核结肠癌4
病理学实验指导
内科护理学授课教案:内分泌与代谢疾病病人
内科学图片库:肺栓塞图片9
医学统计学电子教材:Distributions
触屏版
电脑版
全站搜索
网站导航
版权所有:医学全在线(m.med126.com)
网站首页
频道导航
医学论坛
返回顶部