第二部分  病毒学

病毒(virus)是所有微生物中体积最小的一种，绝大部分病毒在普通光学显微镜下不能看到，必需用电子显微镜才可查见。由于病毒具有严格的寄生性，必须在易感的活组织(细胞)中才能增殖，故通常将其接种于动物(小鼠、家兔及猴等)、鸡胚胎或组织(细胞)中使之增殖，进行病毒的分离。有些病毒在寄生的细胞内可形成斑块，称为包涵体，可用普通显微镜检查。

病毒性疾病常用的血清学检查法有血凝抑制、补体结合及中和试验等。近年来www.med126.com/rencai/，随着科学技术的发展，在原有血清学检查技术的基础上，又建立了特异性及敏感性均较高的新的血清学检测法，如荧光抗体检测技术、酶免疫检测技术及固相放射免疫技术等，在实际工作中可随检查目的的不同而选不同的方法。

实验十六  病毒感染形态学观察

病毒体积微小，不仅肉眼看不见，即使是最好的光学显微镜也只能看到个别的大病毒。本世纪30年代初发明了电镜，扩大了人们的视野。在电镜下，不仅能观察各种病毒的外形，且可看清其结构。为了观察病毒与细胞的关系，一般将接种病毒的组织培养固定，包埋后进行超薄切片，染色后观察。观察病毒形态与结构，可用磷钨酸负染法。

一、磷钨酸负染法

磷钨酸负染法是利用重金属盐类溶液处理生物标本，使它在电镜下呈现出良好的反差。经此种染色处理的生物标本，在电镜下与正染色相反，不是亮环境下的黑色物象而是暗背景(重金属染液)下的亮象(物体)。

【材料】

1．病毒悬液。

2．染液：磷钨酸盐(钠、钾)。

3．铜网。

【方法】

1．用吸管吸取少量病毒悬液，直接滴在铜网上，一般每份标本用3～4个铜网。待3～5min后吸去悬液或用小片滤纸吸干，然后用另一吸管吸染液滴于铜网上，待2～3min吸去多余染液，自然干燥后即可进行电镜观察。

2．电镜观察

(1) 形态：电镜下病毒有球形、杆形和蝌蚪形等。粘病毒呈杆状或多形态，腺病毒和小RNA病毒属球形，噬菌体呈蝌蚪形。应用电镜技术也可较为准确地测定病毒体的大小。一般无包膜病毒大小比较一致，有包膜病毒则变动较大，对这类病毒的大小测定，应求其平均值。病毒大小使用的单位为纳米(nm=nanometer)。

(2) 结构：一般而言，大部分球形病毒属立体对称，大部分杆形病毒属螺旋对称。如腺病毒和小RNA病毒呈20面对称；流感病毒则以螺旋对称排列。电镜还可观察病毒有无包膜及亚单位结构。

二、病毒包涵体的观察

在某些病毒感染的细胞内，经染色后，常可在其细胞浆或核内的局部见到一些嗜酸性或嗜碱性的染色改变，称为包涵体。病毒感染形成的包涵体，因在组织细胞内定位不同及其本身的嗜染色性不同而具有诊断价值(如狂犬病病毒包涵体位于脑神经细胞浆药品数据内，腺病毒包涵体位于感染的细胞核内，而巨细胞病毒包涵体则可在胞浆和核内出现)。

【材料】

1．巨细胞病毒。

2．传代人胚肺纤维母细胞培养小瓶。

3．苏木精一伊红染色液。

4．Borin固定液。

【方法】

1．将巨细胞病毒接种于有盖玻片的传代人胚肺纤维母细胞培养小瓶中，37℃孵育，待其出现80%～100%细胞病变后，取出盖玻片，在生理盐水中漂洗2次。

2．用Borin固定液将上述漂洗后的盖玻片固定20～30min，再用生理盐水冲洗2次。

3．苏木精一伊红染色。

4．用光学显微镜(低倍镜或高倍镜检查：在巨细胞病毒感染的人胚肺纤维母细胞核内有嗜酸性包涵体(有时亦可嗜碱性)，包涵体周围有与核膜明显区分的一轮晕。一个核内大多有1个包涵体，但亦有2～3个的。胞浆内可有境界不明的较小嗜碱性包涵体，但诊断意义不大。