南华大学医学院实验教学教案
课程名称病理学 授课章节 免疫组织化学
授课对象本 科 授课学时 4学时
授课方式实验课 教材或讲义 病理学（第七版)
一、实验目的与要求
1、掌握免疫组化的技术方法。
2、掌握免疫组化检测的意义。
二、实验内容
1、HBsAg
乙型肝炎表面抗原(HBsAg)主要用于肝炎、肝硬化和肝癌的研究。
细胞定位：胞浆
镜下观察：在部分肝细胞胞浆内见棕黄色颗粒，HBsAg阳性，说明肝细胞内有乙型肝炎病毒感染。
病毒性肝炎(HBsAg) 20× 病毒性肝炎(HBsAg) 40×
2、HBcAg
乙型肝炎核心抗原(HBcAg)主要用于肝炎、肝硬化和肝癌的研究。
细胞定位：核为主/核周胞浆
镜下观察：在部分肝细胞核和核周胞浆内见棕黄色颗粒，HBcAg阳性，说明肝细胞内有乙型肝炎病毒感染。
病毒性肝炎(HBcAg) 20× 病毒性肝炎(HBcAg) 40×
3、细胞角蛋白Cytokeratin CK
CK主要标记角化上皮、复层鳞状上皮、复层上皮、增生的角化细胞和单层上皮，用于鳞癌，各种腺癌，移行细胞癌阳性标记。在鉴别诊断中可联合EMA和CEA等指标进行上皮性肿瘤与非上皮性肿瘤的鉴别诊断，也可以用于各种癌的研究。
细胞定位：胞浆
镜下观察：在鳞癌癌细胞胞浆内见棕黄色颗粒，CK阳性。
鳞状细胞癌(CK) 20×鳞状细胞癌(CK) 40×
4、上皮膜抗原Epithelial Membrane Antigen (EMA)
EMA是一组糖蛋白，广泛分布在各种正常上皮细胞膜上及其上皮源性肿瘤细胞中，分布范围与细胞角蛋白相似，但对内脏腺上皮的表达优于细胞角蛋白。因此对上皮源性肿瘤，尤其是低分化腺癌，最好与细胞角蛋白联合应用，可提高阳性率。
细胞定位：胞浆
镜下观察：在鳞癌癌细胞胞浆内见棕黄色颗粒，EMA阳性。
鳞状细胞癌(EMA) 20×鳞状细胞癌(EMA) 40×
5、白细胞共同抗原（LCA、CD45)
LCA是造血细胞的特异性标记，主要分布在T、B细胞、单核细胞、粒细胞和前体细胞表面，一般不存在于非造血组织中。因此是区别淋巴瘤，白血病和非造血组织肿瘤的一个良好标记物。
细胞定位：胞浆。
镜下观察：可见淋巴结正常组织结构，在淋巴细胞（包括T、B细胞)、单核细胞胞浆内见棕黄色颗粒，LCwww.med126.comA阳性。
正常淋巴结(LCA、CD45) 20× 正常淋巴结(LCA、CD45) 40×
6、CD20 B细胞
CD医.学全在线20主要分布在B细胞、前B细胞后期和浆细胞之前的B细胞，一般不与T细胞呈交叉反应。对B细胞淋巴瘤和急慢性淋巴细胞白血病等有较好的细胞特异性，因此在恶性淋巴瘤尤其是T或B细胞淋巴瘤的分类上，CD20是最常用的B细胞标记。
细胞定位：胞膜
镜下观察：可见淋巴结正常组织结构，在淋巴滤泡生发中心，B细胞胞膜呈棕黄色，CD20阳性。
正常淋巴结(CD20 B细胞) 20× 正常淋巴结(CD20B细胞)40×
7、CD3 T细胞
CD3对早期T细胞有较高的特异性，对B细胞不表达，主要用于T细胞淋巴瘤的诊断。其特异性较高但敏感性偏低，因此在临床应用上与CD45RO联合检测，以提高其诊断准确率。
细胞定位：胞膜
镜下观察：可见淋巴结正常组织结构，在副皮质区，T细胞胞膜呈棕黄色，CD3阳性。
正常淋巴结(CD3T细胞) 20× 正常淋巴结(CD3 T细胞) 40×
8、肌动蛋白Actin
肌动蛋白是一种具有收缩能力的微丝蛋白，广泛分布于几乎所有的肌型细胞中。主要用于检测骨骼肌、平滑肌、血管平滑肌、心肌和肌源性肿瘤包括平滑肌瘤，平滑肌肉瘤和横纹肌肉瘤以及肌上皮细胞和肌上皮瘤等。
细胞定位：胞浆
镜下观察：在阑尾壁肌层及血管壁平滑肌细胞胞浆内见棕黄色颗粒，Actin阳性。
阑尾炎(Actin) 20×阑尾炎(Actin) 40×
9、乳头状瘤病毒PapillomaVirus (PV)
该抗体是与乳头状瘤病毒衣壳蛋白L1蛋白反应获得的蛋白，在正常组织上皮或肿瘤性上皮乳头状瘤病毒感染的组织与细胞中有反应，主要用于人类生殖系统传染性疾病及其肿瘤如宫颈癌的研究，亦可用于食管癌、乳腺癌等恶性肿瘤的研究。
细胞定位：胞核/核周
镜下观察：在部分鳞状上皮细胞胞核/核周见棕黄色颗粒，PV阳性。
三、时间安排（课时4×45’＝180’’)
1、免疫组织化学检测原理、方法介绍 30分钟
2、免疫组织化学检测具体操作 140分钟
3、小结提问 10分钟
四、重点
免疫组织化学检测具体操作过程
五、难点
掌握好每一步的时间及试剂的用量等。
六、主要仪器设备
配套的免疫组织化学检测试剂、工具等
七、复习思考题
本实验中各种蛋白检测的意义。
