第八章  血液系统

第一节  家兔的体外血凝、促凝和抗凝

【实验目的】

（1)学习用玻片法测定凝血时间。

（2)以凝血时间为指标,观察家兔体外血液凝固以及组织因子和肝素对血液凝固的影响，并分析其机理制。

【实验原理】

血液凝固可通过内源性凝血系统与外源性凝血系统两条途径。内源性凝血系统是指参与血液凝固过程的凝血因子全部存在于血浆中,而外源性凝血系统是指在组织因子的参与下血液凝固的过程。本实验直接从动脉取血,由于血液几乎没有与组织因子接触,其凝血过程主要由内源性凝血系统所至。肺组织含有丰富的组织因子,本实验利用肺组织浸出液，观察外源性凝血系统的作用。血液凝固受诸多因素,如pH、温度、与血液接触的物体表面的光滑程度、凝血物质浓度等多种因素的影响,从而导致血液凝固的时间发生改变，因此，可以血液凝固的时间为指标,观察不同因素对血液凝固的影响。

【实验动物】

家兔，体重2.0～2.5kg/只，雌雄不拘。

【实验药品与器材】

1． 药品  

蒸馏水、生理盐水、20%氨基甲酸乙酯或3%戊巴比妥钠溶液、125单位/ml的低分子量肝素钠溶液（临用时配制)、肺组织浸液（含组织因子)。

肺组织浸液制备方法：取新鲜兔肺，剪成小块，洗净血液。磨成糊状。加入3～4倍的生理盐水，摇匀放冰箱中过夜，滤纸过滤后，即可得肺组织浸液，保存冰箱备用。

2．器材

兔常用手术器械一套，尼龙动脉插管1根，大头针4个，玻片3块，滴管5支，标记笔1支，多功能秒表1个，取血硅化试管1支，恒温箱1台。

【实验观察指标】

凝血时间测定（小时：  分钟：   秒：   )

【实验方法与步骤】

1．实验前的准备

（1)打开恒温箱，灌入适量的自来水至试管架的平面，恒温37 ℃。待用。

（2)取干净、干燥的玻片3块，编号。

（3)动物准备：兔称重后，用20%氨基甲酸乙酯4ml/kg或3%戊巴比妥钠溶液1ml/kg麻醉，注射速度要慢；背位固定，行颈总动脉分离术和尼龙管插管术（暂不放血)。

（4)按表8-1中实验的项目在玻片上分别用不同的滴管加入相应的试剂（注意不要混淆)。然后将玻片放入恒温箱内的玻片架上，加温至37 ℃。

表8-1家兔的体外血凝、抗凝和促凝因素对凝血时间的影响

（5) 取干净、干燥的硅化试管1支，迅速放入动脉血2ml（注意：经尼龙动脉插管取放血时，应先弃掉前面1ml血液)；

2．凝血时间测定

（2)取血后，立即用滴管注射器吸取血液样本，并在每块玻片的试剂上加入等量的2滴血液，立刻计时，同时手指轻弹玻片将试剂和血液混匀。

（3) 每隔2秒钟，用大头针对各玻片的血液样本由外向里朝一个方向挑血丝（纤维蛋白丝)，见到第一根血丝时，立即终止计时。从开始计时到终止计时的一段时间即为玻片法的凝血时间。将该时间记录到表8-1中。

【注意事项】

（1)所用玻璃器皿要求干净、干燥。

（2)专用试剂、大头针和滴管不能混淆，以免影响实验结果。

（3)计时要仔细和准确、因为第一凝血丝的出现是瞬间的。

【思考题】

（1)比较表8-1中各凝血时间，为什么时间有长短？

（2)在肺组织浸液促进血凝块出现后立即加入肝素溶液2滴，仔细观察兔凝血块是否能溶解？为什么？

 （金海燕)

第二节 急性弥散性血管内凝血（DIC)

【实验目的】

（1)观察家兔体内肠系膜微循环的血液流动特点。

（2)了解复制 DIC 动物模型的方法。

（3)观察组织因子在家兔体内促凝过程并分析其作用机制。

（4)观察肝素预防血液凝固的作用。

（5)了解与血液凝固有关的实验室检查及原理。

【实验原理】

 DIC 是指在某些致病因素作用下 , 凝血因子和血小板被激活、 大量促凝物质入血 , 引起以凝血功能障碍为主要特征的病理过程。临床上主要表现为出血、全身微血管内微血栓形成、溶血甚至休克。同时还可导致肾脏、肺、肝脏等各个器官发生功能障碍 , 严重或持续时间较长则可导致受累脏器功能衰竭。

【实验动物】

家兔，体重2.0～2.5kg/只，雌雄不拘。

【实验药品与器材】  

1．药品  

20%氨基甲酸乙酯或3%戊巴比妥钠溶液、蒸馏水、生理盐水、低分子量肝素钠溶液（临用时，一支肝素溶液用生理盐水稀释10倍)、肺组织浸液。

2．器材 

   Compact-X型全自动血液凝集分析仪，BL-2000型微循环观察仪；手术器械一套、尼龙动脉插管，5ml注射器3个、1ml注射器1个，计时钟1台。

【实验观察指标】

（1)肠系膜微循环凝血时间测定（小时：  分钟：   秒：   )，计时从注射试剂开始到血流停止为止。凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、 凝血酶时间(TT)/ 爬虫酶时间、 纤维蛋白原(FIB)、凝血因子浓度(Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ、Ⅺ、Ⅻ)、抗Ⅹa因子肝素检测、D二聚体。

（2)肠系膜微循环固定视野内毛细血管数、管腔直径和血流速度。

（3)呼吸频率、嘴唇、黏膜的发绀情况。

【实验方法与步骤】

1.劲总动脉动插管取血

家兔称重后，用20%氨基甲酸乙酯5ml/kg或3%戊巴比妥钠溶液1ml/kg麻醉，背位固定后，行颈总动脉分离术和尼龙管插管术。取血2ml做血凝指标检测。

2.家兔肠系膜微循环暴露手术

在兔右腹侧部（近兔台处)作一平行于兔身体纵轴的约2cm长的切口，打开腹腔，轻轻拿出一小段小肠，找出肠系膜的透明部分，将其置于低倍显微镜下，找到微循环血液流速很快的部分，并在高倍镜下进一步找到含有数根仅有单个细胞通过的毛www.med126.com/hushi/细血管的肠系膜，固定该视野，以便观察其变化。（用湿润的生理盐水纱布轻轻盖在肠系膜上)

3．三只家兔，分别编号1、2、3。做以下实验：

（1) 注射生理盐水组：在2分钟内给1号兔缓慢静脉注射生理盐水 4 ml； 

（2) 肺组织浸液促凝组：在2分钟内给2号兔缓慢静脉注射生理盐水 2 ml和肺组织浸液2ml；

（3) 肝素溶液抗凝组： 在2分钟内给3号兔缓慢静脉注射肝素溶液2ml和肺组织浸液2ml 。

表8-2家兔的体内血凝、促凝和抗凝因素对凝血时间、呼吸及发绀的影响

4. 肠系膜微循环观察

仔细观察固定视野内毛细血管数、管腔直径和血流速度。实验结果经BL-2000医学图像分析系统记录和打印（见第三章第三节)。

【注意事项】

（1)手术中要注意及时止血。

（2)固定选好的微循环观察视野，如视野发生移动，应及时找回，以保证实验结果的前后对比。

    【思考题】

（1)比较三组的微循环情况，是否都有凝血？为什么？

（2)在肺组织浸液组，微循环发生凝血后立即缓慢注射注射肝素溶液2ml，仔细观察兔肠系膜微循环凝血情况是否能改善？为什么？

（3)在肺组织浸液组，微循环发凝血后若兔继续存活，仔细观察1～3小时后兔肠系膜微循环是否发生多处毛细血管壁破裂、出血现象即弥漫性血管内凝血（DIC)现象。

（4)如何预防DIC的发生？

 （金海燕、韩伟)