教研室

临床免疫检验

课程

名称

免疫学及检验

学时

4

检验专业2003 级   1、2、3班

带教时间

2006 年9 月28日---2006   年 9 月 29 日

教师

姓名

王慧

职称

主管技师

实检（见习)项目

双扩试验

本次实验

（见习)

目的、

要求

1．掌握凝集反应、沉淀反应的基本原理。

2．熟悉凝集反应、沉淀反应类型及特点。

3．熟悉体外抗原抗体反应临床检测意义。

内容与安排

学时

一、介绍本次实验、见习的重点及安排

（实验课应包括：1、实验标本的采集，2、实验操作步骤，

3、实验操作过程注意事项，4、实验结果的评价及临床意义)

1、原理：将抗原和抗体分别加到琼脂凝胶板上的小孔中，使两者相互扩散，经一定时间后，若两者特异性结合，在琼脂孔间形成白色沉淀线。

2、器材与试剂

3、操作步骤：浇板→制备打孔器→打孔→固定、封底→加样→温育→观察结果(24小时后)

4、注意事项

1)． 掌握好琼脂的温度

2)浇板时，琼脂面要铺平、无气泡；浇好后要放置２分钟凝固。

3)． 打孔时避免出现裂缝

4)加样时避免样品溢出孔外

5、结果的判断:置室温或37℃18～24h后，凝胶中各自扩散的抗原和抗体可在浓度比例适当处形成可见的沉淀线。根据沉淀线的形态和位置等进行分析判断。

6、检测的临床意义：

1)应用于疾病的www.med126.com/Article/诊断及普查；

2)用于抗原抗体的免疫学分析：抗原或抗体的存在与否及其相对含量的估计沉淀线的形成是根据抗原抗体两者比例所致；抗原或抗体相对分子量的分析抗原或抗体在琼脂内自由扩散，其速度受分子量的影响。分子量小者扩散快，反之则较慢；用于抗原性质的分析两种受检抗原的性质完全相同、部分相同或完全不同；用于抗体效价的滴定双向扩散技术是抗血清抗体效价滴定的常规方法。

7、方法学评价：操作简便易行，特异性好;但敏感性较低。

8、学生分组试验

二、讨论思考题：

1、检测抗血清效价的方法有哪些？

2、琼脂双扩散试验主要可用于哪些方面？

3、试从不同角度分析琼脂双扩散试验与单扩散试验的区别？

三、小结要点

1、实验操作情况

2、注意制板时琼脂的温度及浇板的动作要果断迅速；打孔时避免琼脂层脱离玻片底部，避免出现裂缝。

3、实验结束后于第二于下午观察试验结果

四、布置学生作业内容

1、书写实验报告(包括：实验目的、原理、器材和试剂、操作步骤、注意事项、、方法学评价、实验结果、结果分析及结论、讨论)

2、思考题

五、下次实验（见习)课预习范围及后续程介绍

下次实验课内容为：ELISA检测乙型肝炎病毒标志物

预习内容：什么是ELISA？ELISA试验可有哪些类型？

4学时

教案制定时间： 2006   年 月 日   带教老师签名：王慧

专业主任审阅意见；

   签名：  年   月   日