教研室

临床免疫检验

课程

名称

免疫学及检验

学时

4

检验专业2003 级   1、2、3班

带教时间

2006 年11 月 16 日---2006   年  11月17 日

教师

姓名

王慧

职称

主管技师

实检（见习)项目

免疫印迹检测ENA抗体

本次实验

（见习)

目的、

要求

1．掌握免疫印迹法原理、ENA多肽抗体测定的临床意义

2、熟悉ENA多肽抗体测定的操作及结果判断

内容与安排

学时

一、介绍本次实验、见习的重点及安排

（实验课应包括：1、实验标本的采集，2、实验操作步骤，

3、实验操作过程注意事项，4、实验结果的评价及临床意义)

1、提问：什么是免疫印迹试验？什么是ENA？什么是ENA抗体？

2、复习相关内容：免疫印迹试验的原理-典型的印迹实验包括三个步骤：
 第一阶段为SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE)。
第二阶段为电转移。
第三阶段为酶免疫定位。

3、免疫印迹法检测ENA的原理：将待检血清加在硝酸纤维膜上，待检血清中存在的抗ENA抗体分别与硝酸纤维膜上的相应抗原区带结合，当再加入酶标记抗人IsC抗体后形成抗原—抗体-酶标记抗体复合物，再加入酶的底物，出现显色反应，凡有抗ENA抗体与膜上抗原结合的位置，均会因酶促反应而显色。参照此时抗原区带的分子量及各区带的相对位置，可辨读出各特异性抗ENA抗体。

4、器材与试剂

5、操作：配制洗涤液→加样→混匀→置37度温箱水浴→洗涤→加酶结合物→置37度温箱水浴→洗涤→显色置37度温箱水浴→洗涤→终止显色

6、注意事项

7、结果判断

8、ENA抗体区带显色及意义

（1)抗U₁RNP抗体：多见于混合性结缔组织病。

（2)抗Sm抗体：抗Sm抗体是SLE的特异性标志之一。

（3)抗SS-A、抗S会计资格S-B抗体：主要见于SS。

（4)抗Jo-1抗体：PM和DM的标志性抗体。

（5)抗Rib抗体：SLE的标志性抗体

（6)抗Scl-70抗体：  PSS的标志性抗体

9、方法学评价

11、学生分组试验

二、讨论思考题：

1、为何IBT具有高度的特异性和敏感性？

2、如何正确判断ENA多肽抗体类型，为什么？

三、小结要点

1、实验操作情况

2、结果判断时需注意带型与显带位置相结合进行

四、布置学生作业内容

1、书写实验报告(包括：实验目的、原理、器材和试剂、操作步骤、注意事项、、方法学评价、实验结果、结果分析及结论、讨论)

2、思考题

五、下次实验（见习)课预习范围及后续程介绍

下次实验课内容为：免疫荧光试验等(电教)

预习内容：什么ANA？

4学时

教案制定时间：  2006   年   月 日   带教老师签名：王慧

专业主任审阅意见；

   签名：  年   月   日