课程名称

临床检验基础学

授课题目（章节或主题)

血液分析仪原理及应用

授课教师

吴晓蔓

所属二级学院

检验系

所属教研室

临床检验基础

职称

教授

授课时间

2008年3月25 日第5周 星期二第 1～2节第1 次课

授课时数

8学时

授课班级

  检验 专业（本科√  专科□)2005   级   1，2，3   班

教学课型

理论课√ 实验课□ 习题课□ 讨论课□ 实习（践)课□  其它□

教材名称、作者、出版社及出版时间

临床检验基础 熊立凡主编 人民卫生出版社 2007第四版

教学目标与要求：

掌握

1．试述血液分析仪检测白细胞的原理，列举白细胞检测参数

2．VCS检测血细胞的特点。

3．血液分析仪检测白细胞分类、网织红细胞、有核红细胞、网织血小板有哪些特殊细胞染色法

4． 简述三分群血液分析仪细胞检测的主要原理。

熟悉

1．DHSS检测血细胞有何特点？

2．射频电导法可检测细胞的哪些特征？

3．简述流式细胞术检测细胞的主要原理。

4．血液分析仪应用分光光度法何种原理、检测何种物质？

5．MAPSS检测血细胞具有何特点？

6．血液分析仪检测红细胞计数、血小板计数分别应用哪些原理？

了解

1.流式细胞术Mie光散射理论。

2.简述激光散射法系统的基本组成。

3.血液分析仪应用哪两大类溶血剂检测血红蛋白？各有何特点？

4.试列举血液分析仪检测红细胞的原理及检测参数。

5.血液分析仪检测血小板的原理及检测参数

主要知识点、重点与难点：

主要知识点：

1．血液分析仪检测白细胞的原理，列举白细胞检测参数

2．VCS检测血细胞的特点。

3．血液分析仪检测白细胞分类、网织红细胞、有核红细胞、网织血小板有哪些特殊细胞染色法

4．简述三分群血液分析仪细胞检测的主要原理。

重点与难点中国卫生人才网：

血液分析仪检测白细胞的原理

血液分析仪检测白细胞分类、网织红细胞、有核红细胞、网织血小板有哪些特殊细胞染色法

简述三分群血液分析仪细胞检测的主要原理。

教学方法（请打√选择)：

讲授法√　 讨论法√ 　演示法□　 自学辅导法□　 　练习法(习题或操作) □　读书指导法□

ＰＢＬ（以问题为中心的教学法)□　　案例法□　 其他□

教学媒体（请打√选择)：

教材√  板书√  实物□  标本□  挂图□ 模型□ 投影□ 幻灯□   录像√   CAI（计算机辅助教学)□

教学过程设计（包括讲授内容、讲授方法、时间分配、媒体选用、设计等)：

自动血液分析仪（automated hematology analyzer，AHA)

血细胞计数仪（blood cell counter)是目前国内外临床检验最常用的筛检仪器之一。

现代血液分析仪的功能有：

第一节 检测原理

五、血液分析仪检测参数原理

（一)血液分析仪检测参数原理

（二)白细胞系列参数检测原理 

1．体积、电导和光散射（volume，conductivity，light scatter，VCS)法（图3-5) 

在细胞几近自然状态下，分别应用电阻抗技术检测细胞体积，电导（射频)技术检测细胞大小和内部结构（包括细胞化学成分和核的体积)，光散射技术（10°～70°)检测细胞内的颗粒性、核分叶性核细胞表面结构。

2．流式细胞术、电阻抗、射频和特殊细胞染色法  

①4DIFF通道：利用激光流式细胞术、核酸荧光染色技术，得到4DIFF白细胞散点图（图3-8)，包括中性粒细胞和嗜碱性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞和未成熟粒细胞。

②WBC/BASO通道：在碱性溶血剂作用下，除嗜碱性粒细胞外的其他所有细胞均被溶解或萎缩，随后用流式细胞术计数嗜碱性粒细胞，从而得到WBC/嗜碱性粒细胞百分率和细胞计数绝对值及WBC/BASO散点图。

③未成熟粒细胞信息通道：用射频、电阻抗和细胞化学染色法。在细胞悬液中加硫化氨基酸，幼稚细胞与硫化氨基酸结合的量多于较成熟的细胞、且对溶血剂有抵抗作用。因此，当加入溶血剂时，成熟细胞被溶解，只留下幼稚细胞（含未成熟粒细胞、原始细胞、造血祖细胞)得以计数。IMI通道可定量分析不同类型幼稚细胞。

3．钨光源、激光散射法

 ①过氧化物酶（peroxidase，Perox)染色通道（图3-11)：

过氧化物酶活性强度：嗜酸性粒细胞大于中性粒细胞，后者大于单核细胞；淋巴细胞和嗜碱性粒细胞则无过氧化物酶活性。

②嗜碱性粒细胞/核分叶性（baso/lobularity)通道（图3-12)：

溶解红细胞和血小板，除嗜碱性粒细胞外，其他所有白细胞膜均被破坏，胞质溢出，仅剩裸核，作白细胞计数和嗜碱性粒细胞计数。

③未染色大细胞（large unstained cell count，LUC)检测：在Perox通道，可检测到大于正常淋巴细胞体积平均值2个标准差的细胞，如异型淋巴细胞、浆细胞、毛细胞、幼稚淋巴细胞和原始细胞。

4．多角度偏振光散射法（multi angle polarized scatter separation，MAPSS) 

多角度偏振光散射法分4个角度（图3-13)检测：

①  0°，前向散射光：反映细胞大小，同时检测细胞数量（图3-14)。

②  7°，侧向散射光：反映细胞内部结构及核染色质的复杂性。

③  90°，垂直角度散射光（偏振光)：反映细胞内部颗粒及分叶状况（图3-15)。

④  90°D，垂直角度消偏振散射光；“去偏振”是指垂直方向激光光波运动随光散射结果而改变；在光散射过程中，嗜酸性粒细胞颗粒丰富，可去偏振光，与中性粒细胞鉴别（图3-16)。

5．双流体（双鞘流)动力连续系统（double hydrodynamic sequential system，DHSS)

①白细胞计数通道：用电阻抗法检测。

②嗜碱性粒细胞通道：用专用染液染色，嗜碱性粒细胞具有抗酸性，而其他细胞胞质溢出，成为裸核，用电阻抗法检测，所得结果与白细胞/血红蛋白通道（采用鞘流阻抗法测定白细胞)的白细胞结果进行比较（图3-19)。

③白细胞分类通道：双鞘流系统中，用流式细胞光吸收、电阻抗和细胞化学染色液对细胞脂质和蛋白组分染色检测除各类嗜碱性粒细胞以外的白细胞（图3-20)；在幼稚红细胞通道，荧光染色，进行白细胞分类。

双矩阵LIC散点图可将幼稚细胞分为3个亚群（图3-22)：

①未成熟粒细胞（immature granulocyte，IMG)：包括异常中性粒细胞、晚幼粒细胞、中幼粒细胞、早幼粒细胞、原始粒细胞。

②未成熟单核细胞（immature monocyte，IMM)：包括早幼单核细胞、原始单核细胞。

③未成熟淋巴细胞（immature lymphocyte，IML)：包括早幼淋巴细胞、原始淋巴细胞等。

（三)成熟红细胞系列参数检测原理

1．电阻抗法  依据红细胞大小和数量进行红细胞计数（图3-23)。

2．流式细胞术、鞘流电阻抗法

3．流式细胞术激光散射法 

（1)红细胞/血小板检测通道：

（2)红细胞散点图：

4．电阻抗法和光散射法 

（四)血小板系列参数检测原理

1．电阻抗法 

2．流式细胞激光核酸荧光染色和电阻抗法 

3．激光散射法 

4．固体激光散射法、电阻抗法和单克隆抗体荧光染色散射法 

（五)血红蛋白浓度测定检测原理 

1．改良氰化高铁血红蛋白法  测定波长540nm，稀释液含氰化物成分。

2．非氰化高铁血红蛋白法  即稀释液不含氰化物配置的成分。如SLS-Hb测定法。

（六)网织红细胞系列参数检测原理 

1．非荧光染料染色法  用新亚甲蓝对网织红细胞RNA染色，同时用一种试剂使红细胞内血红蛋白溢出后变为“影细胞”，可减少对网织红细胞检测的干扰，采用VCS技术测定网织红细胞（图3-34)。

2．荧光染料染色法

（1)用聚次甲基染RNA和噁嗪染执业兽医DNA法：

（2)用氧氮杂芑750染RNA法：

（3)用非对称菁（asymmetrical cyanine)荧光染料染RNA（也可染DNA)法：

（4)用噻唑橙染网织红细胞RNA法：

（七)有核红细胞系列参数检测原理

1． VCS法  图3-41 VCS法有核红细胞检测散点图

2．流式激光/荧光染色法

（1)聚次甲基荧光染色法：图3-42聚次甲基荧光染色有核红细胞检测散点图

（2)碘化丙啶染色法：图3-43碘化丙啶荧光染色有核红细胞检测散点图

3．白细胞计数和分类通道衍生法  在白细胞计数和分类的过氧化物酶染色通道和嗜碱性粒细胞染色/分叶核细胞通道，根据NRBC的核大小和核密度与各类白细胞进行鉴别（图3-44，图3-45)。

4．阻抗法和噻唑橙荧光染色流式细胞术  图3-46

提问、课堂讨论等师生互动的设计：

1.简述三分群血液分析仪细胞检测的主要原理？

2．血液分析仪检测白细胞应用哪些原理？试列举尽可能多的检测参数？

3．血液分析仪检测红细胞应用哪些原理？试列举尽可能多的检测参数？

4．血液分析仪检测血小板应用哪些原理？试列举尽可能多的检测参数？

5．什么是VCS？检测血细胞各具有何特点？

6．什么是MAPSS？检测血细胞具有何特点？

7．什么是DHSS？检测血细胞具有何特点？

教学小结、复习思考及作业题布置：

1. 血液分析仪有哪几类结果显示形式？

2．简述三分群血液分析仪白细胞、红细胞和血小板直方图的表达特点？

3．哪些因素可影响正常细胞直方图？

4．2005年，国际血液学组织发布的血液分析仪显微镜复检规则有几条？

5．简述红细胞参数RDW、IRF、CHr临床意义？

6．简述血小板参数MPV、IPF临床意义？

教学中的创新点（加强基础与临床联系、外语运用、启发学生思维、指导学生自学、介绍学科新进展等方面)：

加强基础与临床联系、 介绍学科新进展、提出理论联系实际，检验结果必须结合临床表现等

参考资料（包括辅助教材、参考书、文献等)：

1. 丛玉隆 ,王淑娟主编:《今日临床检验学》, 中国科学技术出版社,1997年。  

2．丛玉隆 ,乐家新，秦小玲，杨宏伟，王丹玲主编:《血细胞分析技术与临床》,天津科学技术出版社, 2002年。

教研室

意 见

符合教学要求，同意。

教研室主任签章： 年　　月　　日

教学后记（即教学实施情况总结分析，在课程结束后填写)

血液分析仪是临检基础中发展较快的内容，本教材新增的内容很多，也非常前沿。本内容为8学时，但时间较紧，内容太多，也比较重要，在以后的教学中可适当增加课时。