本方法采用高效液相色谱法测定苯巴比妥片中苯巴比妥的含量。

本方法适用于苯巴比妥片。

供试品经40%甲醇溶液溶解并用水稀释，进入高效液相色谱仪进行色谱分离，用紫外吸收检测器，于波长215nm处检测苯巴比妥的峰面积，计算出其含量。

40%甲醇溶液

1. 仪器

1.1 高效液相色谱仪

1.2 色谱柱

十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，理论板数按苯巴比妥峰计算不低于2000。

1.3 紫外吸收检测器

2. 色谱条件

2.1 流动相：甲醇 磷酸盐缓冲液=40 60

2.2 检测波长：215nm

2.3 柱温：室温

1. 对照品溶液的制备

精密称取苯巴比妥对照品适量，用40%甲醇溶解并定量稀释制

2. 供试品溶液的制备

取供试品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于苯巴比妥30mg)，置100mL量瓶中，加40%甲醇溶液适量，超声处理10分钟使苯巴比妥溶解，加40%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5mL，置50mL量瓶中，加40%甲醇稀释至刻度，摇匀，即为供试品溶液。

注：“精密称取”系指称取重量应准确至所称取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。

分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20mL，注入高效液相色谱仪，用紫外吸收检测器于波长215nm处测定苯巴比妥（C₁₂H₁₂N₂O₃)的峰面积，计算出其含量。

中华人民共和国药典，国家药典委员会编，化学工业出版社，2005版，二部，p.317。