本方法采用高效液相色谱法测定盐酸四环素片中盐酸四环素（C₂₂H₂₄N₂O₈ ·HCl)的含量。

本方法适用于盐酸四环素片。

供试品制成0.01mol/L盐酸溶液，进入高效液相色谱仪进行色谱分离，用紫外吸收检测器，于波长280nm处检测盐酸四环素吸收值，计算出其含量。

1. 0.1mol/L草酸铵溶液

2. 二甲基甲酰胺

3. 0.2mol/L磷酸二氢铵溶液（用磷酸调pH值至2.5±0.05)

4. 氨试液

5. 0.01mol/L盐酸溶液

1. 仪器

1.1 高效液相色谱仪

1.2 色谱柱

十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（pH值适应范围应大于8.0)，4-差向四环素、差向脱水四环素、盐酸四环素、盐酸金霉毒及脱水四环素间的分离度均应符合要求。

1.3 紫外吸收检测器

2. 色谱条件

2.1 流动相：0.1mol/L草酸铵溶液 二甲基甲酰胺 0.2mol/L磷酸二氢铵溶液=68 27 5，用氨试液调节pH值至8.3。

2.2 检测波长：280nm

2.3 柱温：35℃

1. 称取供试品

取本品10片，精密称定，研细，精密称取本品适量（约相当于盐酸四环素120mg)，置200mL量瓶中。

2. 对照品溶液的制备

精密称取30mg，加0.01mol/L盐酸溶液溶解并制成每1mL含0.6mg的溶液，摇匀，即得。

3. 供试品溶液的制备

将供试品加0.01mol/L盐酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

注：“精密称取”系指称取重量应准确至所取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。

分别精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各20μL 注入高效液相色谱仪，用紫外吸收检测器，于波长280nm处测定四环素的吸收值，计算出其含量。

中华人民共和国药典，国家药典委员会编，化学工业出版社，2005年版，二部，p.484。