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中国幽门螺杆菌研究:幽门螺杆菌检测的进展
来源:本站原创 中医理论数据 字体:

1983年澳大利亚学者Marshall等首次从胃炎患者的胃粘膜中分离出一种螺旋弯曲杆菌,引起了广泛关注和研究。由于检测手段的不断进步和发展,提高了临率诊治胃十二指肠疾病的水平,更新了人们对胃十二指肠疾病的传统观念和认识。

1 幽门螺杆菌的研究现状

该菌从形态学上看,在体内呈螺旋杆状,在体外培养呈弯杆状,故被正式命名为幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)。1990年8月的悉尼国际胃肠会议肯定了Hp与慢性胃炎(CG)消化性溃疡(PU)的关系。实验证明,此菌的存在与病变程度有密切联系。在一些胃十二指肠疾病中Hp感染率很高,检出率为58%~100%。有人通过对胎儿、新生儿、婴幼儿、正常人免疫学及细菌学的研究认为,人体胃粘膜出现Hp是外源性感染方式,人与人及人与动物之间的传染是Hp的可能传播途径。城市人口感率高于农村人口,澳大利亚土著人的Hp感染率显著低于随机挑选的献血员。揭示密切的社会接触有利于Hp感染的流行。Hp感染的致病机理至今尚未完全阐明。贾博琦认为,可能是隐性感染过程,即在Hp浸润下,胃粘膜充血、水肿造成Hp生长的适宜环境,Hp借机侵入粘膜下层生长繁殖,并逐渐发展为慢性炎症或溃疡。张振华等认为,Hp对人感染过程分为3个价段:①Hp借其螺旋状菌体及其结构的特征,穿透粘膜表面的不溶性粘液层;②借Hp表面菌毛样网状结构与胃粘膜上皮表面相应的受体结合,在胃壁稳定持续地定居;③再由Hp的LPS或其它的细胞毒素引起胃粘膜非特异性炎症。在此基础上再加上胃酸、胃蛋白酶的作用造成炎症或溃疡。Morgan通过对Hp的流行病学、细菌学、病理学、病因学、临床诊断学与药物治疗等方面进行的研究证实45%的Hp有细胞损害作用。Hp含有多种生物化学损伤因子:①Hp含类脂多糖脂肪酸A,它具有Gram阴性菌的内毒素特性;②有丰富的尿素酶活性,它分解尿素成NH4+与CO2,而NH4+可破坏粘膜屏障,使跨膜电位发生改变,引起细胞通透性增加,H+逆相扩散,产生糜烂和溃疡。③Hp有蛋白分解酶,将高分子的粘液分解为低分解为低分子物,使粘度减低,不能阻止H+逆相扩散。④Hp感染染致免疫反应,在急性活动期,局部出现炎症细胞浸润(中性多核为主),在慢性期,局部出现淋巴细胞,浆细胞浸润和SIgA及SC为主。⑤Hp增强活性氧的生成而介导粘膜损害。从组织学观点看Hp感染加重了洗动性胃炎、中性粒细胞浸润、破坏腺体导致萎缩性胃炎。也可损害胃排空而促进溃疡形成。总之Hp的存在及其致病性已不容置疑,关键在于提高对Hp的检测水平,针对病因进行有效治疗并通过对Hp的临测指导临床治疗。

2 幽门螺杆菌检测的进展

Hp的检测方法目前已有尿素酶试验、细菌培养、活检标本切片染色、直接涂片染色、14C呼试验及免疫学方法等各种测定法。权衡利弊各有优缺点。

2.1 尿素酶试验

该试验是所有检测手段中最为简便迅速的一种方法,在胃镜检查同时进行,敏感性和特异性分别达91%和100%时,数分钟即可做出诊断。检查结果与直接涂片法、分离培养法、组织病理学结果一致或近似。活检标本的尿素酶活性主要与感染的数量多少有关,量少时可能造成假性反应,而其它产生尿素酶的细菌也可能造成假阳性,但仍不失为一种最初检测Hp感染的有效手段。

2.2 细菌培养

胃粘膜组织的细菌培养是诊断Hp感染的最可靠方法,往往做为验证其它检测手段的“金标准”。但不少因素可能会影响Hp的培养而致假阴性。如:胃粘膜组织中的www.med126.comHp的数量过少、细菌繁殖能力差等。

2.3 活检标本切片染色

将胃粘膜活检组织标本用100%中性福尔马林固定,常规石蜡包埋、切片染色。染色的方法有很多种,主要有Warth-Starry(W-S)染色,改良Giemsa染色,Gresyefast,HE和荧光染色,其中(W-S)染色效果最好,细菌清晰易辨,特异性和敏感性几乎均达100%。但该法繁琐且需一定技术。此外HE染色法既可供组织学运用又可检查Hp。也可做为一种常规检测方法。Langdale-Brown等报道用吖啶橙荧光染色,Hp易辨认,且方法简单、快速,尤其在Hp量少时优于W-S和Giemsa染色,不易漏诊。

2.4 直接涂片染色

Pinlard用相差显微镜直接检查涂于玻璃片上的胃粘膜查Hp,敏感性达100%。

2.513C14C呼吸试验

有人利用Hp产生的尿素酶能分解尿素的原理,将胃内用核素标记的尿素分解产生CO2和NH2,CO2被吸收后经肺排出,如果胃粘膜有Hp存在,则呼出气中就有核素标记的CO2出现。检测Hp的敏感性和特异性分别达到100%和88%,Hp清除后14CO2呼出减少。Ormand等发现收集服用核素标记www.med126.com/shouyi/的尿素后20min的呼气体即可有效地检测Hp感染。

2.6 免疫学方法

佐贯等采用乳胶凝集试验检测血中抗HpIgG抗体,并与组织培养法和镜检法进行对照,血中抗Hp抗体与粘膜内Hp检出一致率为73.1%,特异性为60%~100%,敏感度为81.3%,对Hp感染的筛选诊断具有一定的实用价值。Rathbone等用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定73例经胃镜检查并活检确诊的患者血清Hp抗体,发现其敏感性和特异性分别达到93%和97%。Engstrand等建立了检测Hp的单克隆抗体方法,为诊断Hp感染提供了更为特异的方法。张启波等利用初步纯化的Hp的尿素酶为抗原对120例病人的血清抗Hp抗体进行了ELISA测定,对照细菌培养等方法显示敏感为95%,特异性为91%。吉林市第222医院用血清免疫荧光方法诊断Hp感染,显示很高的敏感性。浙江医科大学用亲和素一生物素(ABC)法检测活检组中的Hp抗原,可显著提高诊断的灵敏性。

2.7 其它

Sehneider等报道,让患者吞入系线胶囊以收集胃内粘液,再通过涂片和尿素酶试验检测粘液内的Hp,发现其特异性、敏感性也很高。郎大裕等用一种添加了尿素的pH指示剂的酚红,使Hp染色,通过内镜观察Hp在人胃内的分布情况,应用本法的30例胃溃疡患者中26例色素撒布后立即可以见到发红现象。全部病例都可在发红的部位检出Hp。

3 幽门螺杆菌检测的展望

为克服Hp检测中的假阳性结果,中山医科大学与澳大利亚学者合作探讨了血清学与尿素呼气试验诊断Hp感染的价值,在血清学试验中对接近界限值的阳性血清再增加一个空肠弯曲菌吸收试验,可提高血清学诊断的特异性,呼气试验的敏感性为98.7%,特异性为97.1%,并能准确测定Hp阴转及复发或再感染,可望成为抗Hp治疗的药物筛选及疗效监测的重要手段。Megraud等用DNA杂交技术检测Hp,从理论上讲其特异性好,有发展前途,但目前尚不能应用于活检标本的Hp检测。

综上所述,Hp感染与胃十二指肠疾病的关系已证明,随着医学研究的不断深入Hp的检查方法也将不断取得突破性进展。

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