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医学微生物学-实验指导:实验七 细菌的变异
来源:南华大学资源网 更新:2013/9/10 字体:

实验七  细菌的变异

细菌和一般生物一样,也具有遗传性和变异性。细菌在一定的环境条件下,其性状相对稳定,传给后代,维持其种属的特性称细菌的遗传性。而细菌子代与亲代生物学性状上存在程度不同的差异,称为变异。在一定环境条件下细菌遗传物质结构的改变,将会引起细菌的性状发生改变,分为表型变异与基因型变异。如L型细菌的变异,表现为细菌细胞壁的缺陷。有的细菌从有鞭毛到失去鞭毛的变异,亦称H-O变异。

研究细菌的变异性有助于疾病的诊断、预防、治疗。

(一)细菌的L型变异

原理

细菌被溶菌酶水解或被抗生素(如青霉素)阻止肽聚糖合成后,都将失去细胞壁,在渗透压平衡的培养基中,革兰阳性菌呈原生质体,革兰阴性菌呈圆球体,若继续生长和分裂,则称为L型菌。若处于低渗环境中,细菌将膨胀和破裂。

材料

1.L型培养基 牛肉浸液800ml,蛋白胨20g,氯化钠50g,无菌人血浆200ml,琼脂8g,pH7.4,常规高压灭菌,倾注平板时加入无菌血浆。

2.新青霉素Ⅱ药物滤纸片,每片含药为40µg。

3.革兰氏染色液和细胞壁染色液。

4.金黄色葡萄球菌肉汤培养物。

方法

1.于L型培养基内均匀涂布0.05ml金黄色葡萄球菌肉汤。取青霉素药片1张贴于平板中央,置37℃培养。

2.低倍镜下逐日观察滤纸片周围抑菌圈内有无油煎蛋状小菌落(即L型菌落)出现。

3.取L型菌落和原菌(作对照)涂片,均分别作革兰染色和细胞壁染色,油镜观察。

结果

抑菌圈内可有油煎蛋状小菌落,染色后可见L型菌呈多形性和细菌壁缺陷现象。与正常菌明显不同。

(二)变形杆菌的鞭毛变异

材料与方法

l.取变形杆菌18~24h普通琼脂斜面培养物,分别点种于0.1%石炭酸琼脂平板和普通平板边缘处,切勿划开。

2.置37℃培养24h后,观察和www.med126.com/yishi/比较两种培养基上变形杆菌生长情况。

结果

0.1%石炭酸培养基上变形杆菌只在点种处生长,而普通培养基上变形杆菌呈迁移性生长。

(三)细菌的耐药性变异

原理

细菌的耐药性可以由非遗传性的生理性适应引起,当药物除去后,细菌耐药性消失;也可以通过下列三种遗传性机理中的任何一种获得耐药性.即基因突变、重组和获得带有耐药基因质粒。这三种类型,除去药物后,细菌仍然具有耐药性,而且可以遗传。

材料

1.普通琼脂平板。

2.含青霉素(10~15u/m1)琼脂平板。

3.金黄色葡萄球菌敏感株和耐药株。

方法

1.将普通琼脂平板分为两半,分别接种金黄色葡萄球菌青霉素耐药株和敏感株。

2.在含青霉素的平板上,同法接种上述2个菌株。

3.置37℃培养24h后,观察结果。

结果

普通平板上,2株细菌均长出菌落;含青霉素平板上,只有耐药株长出菌落。

(四)细菌光滑型与粗糙型的变异

原理

细菌菌落有光滑型(smooth,S)和粗糙型(rough,R)。S-R变异是一种全面的变异,除菌落形态不同外,其生化反应性、毒力和免疫原性等也往往发生改变。

材料

1.5%石炭酸溶液。

2.普通琼脂平板。

3.S型和R型大肠杆菌18~24h培养物。

方法

l.大肠杆菌粗糙型医学全.在线www.med126.com的诱变  将5%石炭酸溶液加于琼脂平板培养基中,使终浓度达到0.05~0.1%。接种S型大肠杆菌于平板上,37℃培养24h后,取单菌落转种于另一上述平板,连续传五、六代即可变为R型。

2.将S型和R型大肠杆菌,分别接种于2个琼脂平板上。

3.置37℃培养24h后,仔细观察比较两型菌落特点。

结果

平板上,S型菌落表面光滑、边缘整齐、湿润;R型菌落表面粗糙、边缘不整齐、干皱。

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