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该方法最常用，又称直肠把握法。先把母牛保定在配种架内（己习惯直肠检查的母牛可在槽上进行)，尾巴用细绳拴好拉向一侧，然后清洗消毒母牛外阴部并擦干。配种员手臂涂上润滑剂，五指并拢，捏成锥形，徐徐伸入直肠排出宿粪，向盆腔底部前后、左右探索子宫颈，纵向握在手中，用前臂下压会阴，使阴门开张，另一只手执输精枪插入阴门，先向斜上前方插入10-15厘米越过尿道口，再转为平插直达子宫颈，这时要把了宫颈外口握在手中，假如握得太靠前会使颈口游离下垂，造成输精器不易对上颈口。两手互相配合，使输精枪插入到子宫颈，并达到子宫颈部或子宫体，然后输精，缓慢抽出输精枪（管)，然后手从直肠里抽出，即可完成输精。　　在操作过程中，个别牛努责剧烈，应握住子宫颈向前方推，以便输精枪插入。操作时动作要谨慎，防止损伤子宫颈和子宫体。特别应注意的是在输精操作前要确定是空怀发情牛，否则易导致母牛流产。直肠把握法的优点是受胎率比阴道开张法高，使用器械简单操作方便。
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