猪蓝耳病毒的分离与鉴定是怎样的?
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目前多将猪原代肺泡巨噬细胞、CL2621细胞系和Marc145细胞用于该病毒培养的分离。 细胞培养法：病毒分离样品选择和采取的所有操作应为无菌规程进行。用免疫组化技术检查发现，病毒存在于病猪的肺泡巨噬细胞，细支气管上皮、肺泡上皮细胞，脾脏的红髓及边缘区的巨噬细胞内。①病毒分离的首选材料是肺、扁
桃体、脾、淋巴结和血清，死产和
流产胎儿的脾肺血清和胸水是适宜的检验材料，弱胎猪和有呼吸道症状的急性感染猪的检出率最高。②常用细胞培养法的细胞系：已知PRRS病毒能在
猪肺泡巨噬细胞(PAM)、传代细胞CL2621和Marc145等细胞系生长。③病毒的分离取流产胎儿，新生仔猪的肺、脾、肝、肾、心、脑、扁桃体、支气管、淋巴结、胸腺和骨髓匀浆制成悬液，进行分离病毒。用含抗生素的维持液（含2%胎
牛血清随MEM营养液)做1:10稀释，4500r/min离心30min，经0.45nm滤膜过滤，上清用MEM做1：30稀释，接种于猪肺泡巨噬细胞(PAM)或CL2621、MA104细胞单层，于35℃吸附24h，加含4%胎牛血清的MEM，培养7d，观察CPE。首次传代有时可能无CPE，需
盲传2-3代。不同的毒株可能适应不同的细胞系，有些毒株仅能在PAM或仅能在CL2621细胞中生长，欧洲株在PAM_上的复制速度更快、效率更高，而CL2621更有利于北美毒株的分离。出现CPE并能被特异的抗血清中和的样品即为PRRS病毒。也可将分离到的病毒用免疫过氧化物酶单层细胞试验进行鉴定。大多数分离物都能适应PAM，尤其是用血清作为分离样品，但不同的毒株对不同细胞是有选择的。有的只能在一种细胞上生长，有的可在多种细胞上生长。以血清和肺组织分离成功率最高，木乃伊胎最低。可用于病毒鉴定的技术有单克隆抗体或多克隆抗体免疫荧光抗体技术和单层过氧化物酶试验，RT-PCR技术以及电镜技术。
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学习了，
