猪圆环病毒病的诊断与控制措施
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本文综述了猪圆环病毒的特性、致病性，猪圆环病毒病的
流行病学、临床症状、病理变化、诊断等的研究进展，结合中国实际提出了本病的防制对策。 PCV病毒在兽医临床可致猪发生：猪断奶后多系统衰竭综合征(PMWS)、猪间质性
肺炎(IP)、猪皮炎和
肾病综合征(PDNS)以及由圆环病毒引起的母猪繁殖障碍。 1 病原学研究进展 1.1 病原分类 PCV在分类学上属于新的DNA圆环病毒科、圆环病毒属，即小环状病毒属，这是由国际病毒分类委员会在第六次学术报告会上命名的。PCV与鸡传染性贫血病毒(CAV)、
鹦鹉喙羽病毒(PBFDV)及几种植物病毒共同划归环病毒科(Circoviridae)。 1.2 病原结构 PCV为无囊膜的正20面体，直径17～22nm，含有1.76～2.3kb的单链环状DNA，CsCl浮密度1.33-1.34，相对分子质量5.8×102，沉降系数为52S。在长度为1758bp的核苷酸序列中，具有4个开放阅读框架(ORF)，即Replicase V1(35700)和V2(9800)，Capsid C1(27500)和C2(23200)。衣壳蛋白为1条多肽链，其分子量为3600Da。Brina等主张根据PCV致病性、抗原性及核苷酸序列将PCV分为PCV-1和PCV-2两个型。病毒基因组是1条共价闭合的单股负链环状DNA，PCV基因序列已经明确。PCV-1型无致病性，包括PCV-PK15及其它无致病性的分离株;PCV-2有致病性，目前归入PCV-2的有分离自美洲、欧洲等地的PMWS病料中分离的一些毒株。ORF1编码与病毒复制相关的Rep蛋白;ORF2编码的蛋白为病毒的主要结构蛋白，具有较好的免疫原性，是研制基因工程苗的首选基因。 1.3 病原特性 北爱尔兰学者Allan等(1994)报道PCV对酸性环境(PH3)、氯仿或者高温(56℃和70℃)有抵抗作用。PCV在原代胎
猪肾细胞、恒河猴肾细胞、BHK-21细胞上不生长，Tischer等认为PCV能在一些来源于猪的细胞中复制，并且依赖细胞周期S期表达的细胞蛋白。Tischer等发现在PK-15细胞培养物中加入d-氨基
葡萄糖，可促进感染细胞内形成包涵体，提高病毒复制，使含有PCV抗原的细胞数提高30%。Allan等(1994)证明了PCV在源于
猪骨髓、外周血液、肺洗出物和淋巴结的单核细胞/巨嗜细胞中的复制。用感染PCV的PK-15细胞接种猪，可以回收到病毒，根据病毒抗原的出现及抗体的产生，表明猪感染了PCV，但不出现临床症状和病变，说明来源于PK-15细胞的PCV是非致病性的，即PCV-1。1997年，在加拿大、西班牙及法国相继报道了PMWS，且患病猪病变部位免疫组织化学染色的PCV抗原，通过原位杂交检出了PCV核酸。1998年，加拿大、美国、法国、西班牙、丹麦、北爱尔兰等国也相继从PMWS患猪分离出新的PCV，即PCV-2。利用这些患猪的组织乳剂或细胞培养分离继代的病毒接种于仔猪，接种猪出现PMWS的特征病变。 1.4 病原致病性 PCV在临床上主要引起猪的传染性先天性
震颤和断乳后全身消耗性衰竭综合症(PMWS)。PCV-2是PMWS的主要病因，但不是唯一的病原。用PCV感染材料经鼻接种3d无菌猪，5周后除检出PCV-2外，还检出猪小RNA病毒，提示PMWS的病因与PCV-2和猪小RNA病毒有关。用PCV-2和猪小RNA病毒的混合物经鼻接种于1～2d的未吸吮
初乳的仔猪，仔猪表现食欲不振、不愿运动、体重减轻和
嗜睡等症状，部分发生死亡。21～26d后剖检，病变与临床上的PMWS病例相似，并从各器官检出PCV-2和猪小RNA病毒。 2 流行病学与临床症状 2.1 流行病学 PCV主要易感动物是猪，但Tischer等报道，在人、牛和鼠血清中也存在能与PCV发生群特异性结合的低水平抗体。PCV经口、呼吸道感染不同日龄的猪，少数怀孕母猪感染PCV后，经胎盘垂直感染给仔猪。感染的猪可通过鼻液、粪便等废物排出病毒。PCV分布广泛。在德国，屠宰猪和2～3岁繁殖
猪血清抗体阳性率达85%。在加拿大，猪血清阳性率在26%～55%。在英国随机采集的猪血清中，阳性率为86%。在爱尔兰，猪血清抗体阳性率达92%。Allan等(1994)对荷兰两群仔猪血清学研究表明，仔猪抗PCV母源抗体在出生后8～9周消失，在13～15周时血清抗体又重新出现，说明仔猪在11～13周受到PCV感染。PMWS可见于5～16周龄的猪，但最常见于6～8周龄。猪群患病率为3%～50%，死亡率在8%～35%。本病发展缓慢，猪群一次发病可持续12～18个月。我国学者王永康在上海郊区观察发现，猪皮炎和肾病综合征的发病率可达11%，死亡率达到40%。此外，本病常与集约化生产方式有关，饲养管理不善、环境恶劣、饲养密度过大、应激、不同年龄和不同来源的猪编群等，均可诱发本病。R .Larochelle等(2002)报道PCV2病毒可间隙性地自公猪精液中排出，感染公猪的精液可看作为一种潜在的PCV2病毒来源。Kiupel M等(2000)报道，被PCV2感染的小鼠能否排毒尚不清楚，但小鼠的先天性及出生后的感染现象说明，可能由于野生小鼠作为PCV2的宿主或传媒的潜在危险及鼠群中感染的流行。 2.2 临床症状 2.2.1 断乳后全身多系统衰竭综合征 PMWS主要影响6-8周龄的猪，很少影响吮乳的猪。临床上表现为多系统进行性功能衰弱为特征的症状，生长发育不良，渐进性消瘦，体重减轻，皮肤与可视粘膜苍白或
黄疸，贫血，肌肉萎缩、衰弱无力，呼吸困难、呼吸过速，一些不常见的症状有下痢、
咳嗽和中枢神经系统紊乱。Harding(1997)报道，在一些猪群中，断奶猪的发病率和死亡率之比为50%。一般而言，患病猪临床表现为
发热、精神不振、被毛粗乱、皮肤苍白、进行性消瘦、发育障碍，而且表现以咳嗽、喷嚏、呼吸加快及呼吸困难为特征的呼吸器官障碍。体表淋巴结，特别是腹股沟淋巴结肿大，部分病例可见皮肤、可视粘膜黄疸，下痢，嗜睡。再一个特征就是猪群的死亡率增加。约20%的猪咳嗽、喷嚏、呼吸困难，死亡率约为8%～35%，10～20%猪皮肤和可视粘膜可见黄疸。由于细菌、病毒的二重感染，常常使PMWS的症状复杂化、严重化。 2.2.2 传染性先天性震颤 先天性震颤的临床变化很大，其震颤为从轻度到重度。在出生后第一周，严重的震颤可因不能吃奶而死亡，活一周的仔猪可以存活下来，但多数在3周时间恢复。震颤为双侧，影响骨骼肌肉，当卧下或睡觉时震颤消失，外界刺激可引发或加重震颤，如声音或温度刺激;有的在整个生长和发育期间都不断发生震颤。主要是母猪在怀孕阶段感染了病毒。Allan等(1995)认为，PCV病毒通过胎盘感染胎儿的可能性很小，或者感染发生在胎儿免疫功能形成以前。Gustafson和Kanit(1974)曾报道母猪在不同的怀孕阶段感染类似PCV病毒时，可引起震颤发生。 3 病理变化 3.1 断乳后全身多系统衰竭综合征 Clark(1997)和Daft等(1996)描述了PMWS的大体和组织病变。患PMWS猪的尸体营养状况差，表现出不同程度的肌肉消耗，皮肤中度苍白，20%的病例呈黄疸。剖检变化主要表现多种组织器官的广泛性病理损伤，最显著的变化是全身淋巴结，特别是腹股沟浅淋巴结、肠系膜淋巴结、气管支气管淋巴结及下颌淋巴结肿大2～5倍，有时可达10倍。切面硬度增大，可见均匀的白色。集合淋巴小结也肿大。发生细菌二重感染的，则淋巴结可见炎症和化脓病变，使病变复杂化。 所有病例几乎都可以见到肺萎缩不全，重量和硬度增加，部分病例尖叶有固质化致密的病灶，肺弥散性病变，肺表面呈花斑状，灰棕色肺叶与正常的黄到粉红肺叶相间。在严重病例，可以观察到黑红或棕色的肺泡出血斑。 半数病例的肝脏肉眼观察呈不同程度的花斑状，为轻度到中度的肝萎缩。肝小叶间结缔组织明显，严重病例的肝小叶，结缔组织非常明显。脾脏增大，切面呈肉状，无充血。半数病例的肾脏被膜下呈现可见的白色灶，所有可见病变的肾脏都肿大、白色，有的因
水肿可达正常的5倍。 自然感染病例中，约有半数猪在胃无腺部形成溃疡。少数病例还见到皮肤出血和坏死、肾衰竭、浆液纤维素性多发性浆液。部分病例回肠可出现花斑状区域，结肠粘膜可能充血或出现瘀血斑。 显微病变可见淋巴细胞-组织细胞浸润，在巨噬细胞、淋巴细胞、内皮细胞、上皮细胞内形成包涵体。在小肠固有层、腹股沟淋巴结内形成合胞体。 3.2 先天性震颤 唯一有关先天性震颤的病理学变化为
脊髓髓磷脂沉着迟缓。Lamar(1971)报道了感染1～13日龄脊髓神经缺乏髓磷脂化。先天性震颤的猪无肉眼变化。在脊髓细胞中未检测到PCV抗原，也未从这些组织中分离出病毒。 4 诊断 对PCV感染的诊断可以通过原代猪肾细胞或猪肾细胞株培养分离病毒，利用免疫染色确定病毒的存在。检测到PCV抗体水平提高也说明最近受到感染。对先天性震颤排除遗传性和化学原因引起的震颤外，可以通过临床症状进行诊断。 4.1 临床诊断 PMWS的临床症状具有特征性，有较高的诊断价值。Rosell等在有PMWS发病史的养猪场挑选出具有发育不良、皮肤苍
白及腹股沟淋巴结肿大症状的15头仔猪，进行病理检查、PCV抗原及核酸检验，结果所有仔猪都患有PMWS。传染性先天性震颤的震颤为从轻度到重度。在出生后第一周，严重的震颤可因不能吃奶而死亡，活一周的仔猪可以存活下来，但多数在3周时间恢复。震颤为双侧，影响骨骼肌肉，当卧下或睡觉时震颤消失，外界刺激可引发或加重震颤，如声音或温度刺激;有的在整个生长和发育期间都不断发生震颤。 4.2 病理学诊断 当发现全身淋巴结肿大，肺退化不全或形成固化、致密病灶时，应怀疑本病。病理组织学检查可见全身淋巴组织的
淋巴细胞减少，单核吞噬细胞类细胞浸润及形成多核巨细胞，如在这些细胞中观察到嗜碱性或两性染色的细胞质内包涵体，则基本可以确诊。 4.3 病毒分离及电镜观察 将病料制成100g/L的组织悬液，加
青霉素(100IU/ml)、
链霉素(100ug/ml)，4℃3000r/min离心20min，取上清液接种于Dulac细胞。接种后6h用300mmol/LD-
葡萄糖胺37℃处理30min，再培养72～96h，将增殖病毒的细胞冻融3次，收集细胞病毒液，用细胞病毒液再接种细胞传代6次。第6代细胞病毒液反复冻融3次，按5g/L加Trition114，37℃处理30min，10000g离心30min，弃沉淀;将上清液加入盛有300g/L蔗糖垫的离心管中，15000g离心3h;弃上清，用0.01mmol/LpH8.0的TE缓冲液重悬并收集病毒，乙酸双氧铀负染色后电镜观察。 4.4 间接免疫过氧化物酶技术 将PK-15细胞在96孔微量培养板上长成单层后，加入10倍稀释的待检猪血清，作用一定时间后吸干洗涤，每孔加入50ul1000倍稀释的HRP标记的
兔抗猪IgG，30℃孵育15min， 吸干洗涤后加入50ul底物溶液，然后，终止反应。用显微镜读取结果，如观察到棕色感染细胞即为阳性。 4.5 DNA原位杂交实验 用特异性核酸探针检测感染病料中的PCV。尤其在感染的淋巴结和
肺脏组织中经常出现明显的杂交信号。 5 防制对策 5.1 实施严格的生物安全措施 Kiupel M等(2000)报道，PCV2病毒能够在BALB/C系小鼠中复制并产生轻微的病变，这种传染是直接的，能经过胎盘感染。相对于自然发生PMWS的猪及PCV2感染的猪而言，感染小鼠体内则没有那样广泛而严重的病理变化，通过胎盘感染PCV可复制出猪的生殖道先天性震颤A2病例。被PCV2感染的小鼠能否排毒尚不清楚，但小鼠的先天性及出生后的感染现象说明，可能由于野生小鼠作为PCV2的宿主或传媒的潜在危险及鼠群中感染的流行。因此要避免鼠、飞鸟及其它动物接近猪场。 5.2 加强良好的饲养管理 在国外，有人尝试使用血清疗法，在降低死亡率方面获得一定成功。具体做法是：采取PMWS猪场健康成年猪的血，抽出血清，每毫升加0.25mg蒽诺沙星或
氧氟沙星或氟苯尼考，也可以按每毫升血清加入欧孢美诺或华西经典4万IU，混匀后分装冷冻保存，在仔猪出生7d后皮下注射3ml/头，有一定效果。但是，本病没有十分有效的治疗方法，抗生素对PMWS患猪无效。但抗生素(如附红散、百草圣等)和免疫增强药物(如
黄芪多糖、流行针等)的使用以及良好的饲养管理有助于控制二重感染。良好的饲养管理主要包括：合适的饲养密度;良好的圈舍通风;减少环境应激;合理分群与混养;注意猪只引种;用高迪-HB按1：800兑水加强有效消毒等等。 5.3 有效预防和控制其它感染性疾病 G.W.Stevenson等(2000)报道，对新生仔猪接种PCV2，诱导了典型PMWS的肉眼损害和显微损害，但在接种后第7周仅表现轻微的临床症状。与此相反，接种含有PCV2和PRRSV的TH可在接种后13天产生严重的消耗性病症和典型的PMWS病损。有研究认为，PMWS、PDNS和IP三种由圆环病毒引起的病例中，病原都不是单一的，其中PCV2约占了90%以上，是主要的病原体，但PRRSV各占有60%左右，是主要的协同病原体。在PDNS中，细小病毒(PPV)占了30%。这说明，防止PCV和使其感染恶化的二重因子，特别是细菌、支原体及其它病毒侵入猪群加重病理损伤。 5.4 加强流行病学和发病机理的进一步研究 目前对本病的流行病学和致病机理还缺乏全面、系统的研究，因此很难提出对PCV有效的预防和控制感染的措施。 5.5 加强疫苗的研究开发 目前，尚没有疫苗，也没有实验性试用过。吴金花、布日额等(2003)建议：研究一整套完善的检测方法和技术体系，搞清楚PCV在我国的流行分布情况;其次是寻找致弱该病毒的有效方法来制备可行的疫苗或根据对PCV全序列的分析，克隆具有免疫原性的基因并进行表达，制备基因工程苗。 5.6 全面评估公共安全 Tischer等(1995)用电子显微镜对
人尿进行检查时，发现了类似PCV的小球形粒子，此后对人、牛、鼠的血清进行PCV抗体检查，发现伴有原因不明发热的人抗体阳性率最高达30%，正常人为20%，牛约35%，鼠12%～69%。Nishizawa等(1997)从人输血后肝炎病例中分离出TT病毒也属于圆环病毒属;Nayar G P等(1999)、佐藤胜哉等(2000)分别报道了牛、
鸽感染圆环病毒。因此，对PCV作为一种人兽共患病病原进行危险性评估十分重要。
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做好疫苗接种，增强抵抗力
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做好免疫
