如何通过血清学诊断猪
炭疽病?
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血清学诊断 炭疽沉淀反应(Ascoli氏反应):当病料已经腐败用细菌学诊断得不到可靠结果,以及检查大量畜产品时,可用炭疽沉淀反应。采取病料以肝、脾、肾以及血液为适宜。将被检血液或脏器研磨后,用生理盐水稀释5-10倍,煮沸15-20min,取浸出液用中性石棉滤过,用毛细管吸取透明滤液,徐徐重积于小试管内的沉淀素血清上,于1-5min内如接触面出现清晰的白色沉淀环(白轮),为阳性。荚膜肿胀试验:有荚膜的炭疽杆菌与抗炭疽荚膜血清结合产生抗原一抗体反应,在荚膜表面发生轻微的沉淀反应,使荚膜增厚,镜检时,在炭疽杆菌的周围可以看到折光性强的荚膜。涂有适当稀释(每个视野约10个菌的浓度)的纯培养物的载玻片或感染7- 8h处死的小鼠腹腔液涂片,滴加一滴抗炭疽荚膜血清,混匀,制成湿片,镜下观察,如有大杆菌周围可见边缘清晰、肥厚不等的荚膜,即为阳性。也可用荧光抗体荚膜染色法,方法是将病料涂片,干燥,固定后用炭疽荚膜血清(即用异硫氰酸荧光素标记的提纯的抗炭疽荚膜血清抗体)染色后,用荧光显微镜观察,则炭疽菌的菌体高度膨大,荚膜呈明亮黄绿色荧光。但应注意类属反应问题。对炭疽芽孢可用炭凝集试验,乳胶凝集试验进行诊断,数分钟之内即可得出结果。 炭凝集试验:玻璃板上滴加被检标本O.lmL(用0.2%
氯化钠溶液稀释),然后加入炭疽炭粉血清0.05mL,混匀,静置1-5min,凡出现“++”以上凝集者,即使炭粉一半凝集,且液体较透明者为阳性,该反应可检出每毫升约含78000个以上的炭疽杆菌芽孢标本。乳胶凝集试验:同一玻板上,分别滴加被检材料2滴,每滴O.lmL,另一侧分别滴加标准炭疽抗原2滴,每滴也为O.lmL,然后再分别往被检材料滴及炭疽标准抗原滴中滴加炭疽乳胶血清及正常乳胶血清各0.05mL,分别混匀,室温下静置,5min内判定结果。当三个对照滴:炭疽乳胶血清加标准炭疽抗原呈“++++",正常乳胶血清加标准炭疽抗原呈“一”,正常乳胶血清加被检标本呈“一”,出现上述结果,说明反应条件正常,这时炭疽乳胶血清与被检标本滴发生反应者为阳性,不发生反应者为阴性。除以上所介绍的方法外,协同凝集反应,酶联植物凝集素吸附试验,琼脂扩散沉淀反应,酶标
葡萄球菌A蛋白(HRP-SPA)间接染色法等也逐步被应用于炭疽的诊断。
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