鹅副黏病毒病的确诊方法是?
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实验室诊断鹅副黏病毒病的诊断可以根据
流行病学、临诊症状和病理变化综合诊断。确诊必须用鸡胚进行病毒分离，以及用血凝试验和血凝抑制试验、中和试验、保护试验等血清学方法进行鉴定。(1)病毒分离①病料采集与处理。分离病毒的病料应采自早期典型病变的病鹅或死鹅，病程较长的病鹅可能有并发症，容易干扰病毒的分离。捕杀病鹅或死鹅应用无菌手续采取脑或肝脏、脾脏组织。将病料磨细，加入灭菌生理盐水或灭菌PBS液制成1：5～1：10的悬液，经3 000转／分，离心30分钟后吸取上清液，按每毫升加入
青霉素、
链霉素各1 000单位，混匀后置4～8℃冰箱中作用2～4小时，或37℃温箱中作用30分钟后取少许液体分别接种于普通琼脂斜面、鲜血琼脂斜面和厌氧肉汤培养基，于37℃培养观察48小时，无菌生长，冻结保存作为病毒分离材料。也可将上清液经滤器过滤后，按每毫升加入青霉素、链霉素各500单位，混匀后置37℃温箱中作用30分钟，作为病毒分离材料。②鸡胚接种。用4～6枚10～11日龄SPF鸡胚，或4～6枚未经新城疫免疫鸡群的鸡胚，每胚绒尿腔接种上述分离材料0.2毫升。接种24小时后每天照蛋4次，连续5天，通常于接种后36～72小时内死亡。接种24小时以后死亡的鸡胚，放置4℃的冰箱内，气室向上，冷却4～12小时。用无菌手续收获绒尿液，并做无菌检查。浑浊的绒尿液和有菌生长的绒尿液弃去不用。将澄清、无菌生长和鸡胚病变典型的绒尿液放置低温冰箱冻结保存供进一步鉴定。(2)病毒鉴定 毒株的鉴定最常用的方法是血凝试验和血凝抑制试验。①血凝试验(HA)。将被检的鸡胚绒尿液病毒用生理盐水按倍增方法稀释成不同稀释度，分别加入于8支小试管，每管0.5毫升或0. 25毫升。然后加入同等量的1%鸡红细胞悬液混匀后，置于20～30℃室温中，15分钟后检查，每5分钟观察1次，观察至60分钟，判定结果。1%鸡红细胞系采取健康
鸡血液。采血时需加入抗凝剂，以生理盐水洗涤3～5次，每次以3 000转／分，离心1 5分钟，将血浆、白细胞等充分洗去，将沉积的红细胞用生理盐水稀释成1%悬液。②血凝抑制试验(HI)。用已知抗鹅副黏病毒血清做血凝抑制试验，对鸡胚的分离物做鉴定。先将已知抗鹅副黏病毒血清做以2为底数的对数稀释，每个稀释度分别加入两排试管中，每管0. 25毫升。另设阴性血清对照管。第一排试管每管加入0. 25毫升含有4个凝集单位的被检病毒液，第二排每管加入0. 25毫升含有4个凝集单位的已知鹅副黏病毒液。混匀后放置37℃温箱作用20分钟后加入1%鸡红细胞悬液，每管0.5毫升，混匀后置于20～30℃室温中，15分钟后每5分钟观察1次，观察至60分钟，判定结果。如已知抗血清对已知鹅副黏病毒的抑制价和被检病毒的抑制价相近，而且都不被已知阴性血清所抑制，即可将被检的病毒定为鹅副黏病毒。③微量血凝试验。存微量凝集板上，从第1～第12孔或根据所需要的孔数，用定量针头每孔加入0. 025毫升生理盐水。用定量针头吸取同等量的被检的鸡胚绒尿液加入第1孔，依次做倍量稀释，至最后一个倍量孔，弃去余液。用定量针头每孔加入0. 025毫升1%鸡红细胞悬液，并设用生理盐水代替被检病毒液的红细胞对照，立即在微量振荡器上混匀，置室温中30分钟左右判定结果。判定方法与试管法相同。④微量血凝抑制试验。在微量凝集板上，两排均从1-12孔或根据抗血清效价所需的孔数，用定量针头在每孔加入0. 025毫升生理盐水。往第1孔中分别加入已知抗鹅副黏病毒血清0. 025毫升，依次做倍量稀释至最后1孔，弃去余液。第一排每孔加入含有4个凝集单位0. 025毫升被检鸡胚病毒液。第二排每孔加入含有4个凝集单位0. 025毫升已知鹅副黏病毒液。微量板在微量振荡器上混匀，置室温中30分钟后用定量针头每孔加入0. 025毫升1%鸡红细胞悬液，并设病毒液和鸡红细胞对照孔，在微量振荡器上混匀，置室温中30分钟左右判定结果。判定方法与试管法相同。
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提高实验室检测
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实验室检测
