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猪病症状治疗:猪分子标记选择之组织样本的采集和DNA提是怎样的?
阶段饲养 更新:2017/8/28 字体:
猪分子标记选择之组织样本的采集和DNA提是怎样的?
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取1块耳组织(约10毫 克)置于1. 5毫升离心管内,用小剪刀将其剪碎。加人0. 4毫升组 织DNA提取液[50毫摩/升Tris-Cl溶液(pH8),100毫摩/升一 EDTA溶液(pH8),100毫摩/升氯化钠溶液,1 %SDS溶液],再加 人蛋白酶K至终浓度100微克/升,55C水浴消化过夜。加入 RNase至终浓度20纳克/毫升,37X:温育1小时。用苯酚和1 : 1 苯酚、氯仿溶液各抽提1次,每次以12 000转/分处理10分钟,将 其上清液移到另一离心管中。加入1/10体积3摩/升NaAc (pH5. 2),混匀后加人2倍体积的无水乙醇沉淀DNA,将DNA絮 状沉淀挑入新离心管中,并用70%乙醇洗1次,真空抽干乙醇。 以适量TE溶液或灭菌双蒸水溶解DNA。
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