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实验动物科学:《北京医学实验动物检定暂行标准》
来源:本站原创 中医理论数据 字体:

一、实验动物管理机构和专业人员要求暂行条例

(一)各单位要成立医学实验动物管理委员会或小组,其机构由科研、实验动物及有关行政管理人员组成。其领导工作由院(所)级主管科研工作的领导同志负责。

(二)凡从事实验动物生产和供应的单位必须配备一定数量的高、中、初级职称的医药卫生、畜牧兽医或生物学的专业人员。

(三)凡饲养、使用实验动物的单位,要配备一定数量的技士、技工级饲养技术人员。

(四)饲养技术人员应有半数以上人员具有初中以上文化程度,所受专业培训应不少于三个月,班、组长应不少于六个月。

(五)专业人员每年必须体检一次,对患有传染病者,应及时调离。

(六)为保证实验动物饲养技术队伍的相对稳定性,其工作周期一般不得少于五年。

(七)为利于医药卫生、科研、教学工作,建议相当于局级以上单位成立处一级的实验动物机构。县、团级单位成立科级机构或隶属于本单位的科研机构。

(八)各单位要对饲养技术员的培养教育、职称评定、劳动保护等给予充分重视。

二、实验动物及动物实验设施的要求

(一)普通动物(通常动物)

1.外环境条件:

(1)院容整齐、清洁、定期消毒;

(2)有一定的绿化面积;

(3)应有专用的垃圾、动物尸体的存放处,并应及时清除;动物尸体须在24小时内焚烧或按有关规定处理;

(4)动物室附近不得饲养非实验用的家禽家畜。

2.动物室建筑条件:

(1)要达到一定的建筑标准;

(2)中小型动物饲养室进出口不得直接对外,应有缓冲间;

(3)玻璃窗加防昆虫的纱门纱窗;

(4)天花板光洁、能消毒;

(5)地面平坦、地面及墙壁能洗刷;

(6)要有自来水和封闭式的下水道(防止野鼠窜入);

3.饲养室内环境条件:

(1)室温应在18度至29度之间(年温差)(大、小鼠、豚鼠、地鼠等);

(2)相对湿度60%±20%;

(3)空气中氨含量应低于20ppm;

(4)室内噪声60分贝以下;

(5)饲养室内要整洁,无杂物、污物、无蚊、蝇、蟑螂等。

4.笼、饲具条件:

(1)应使用易于清洁消毒及操作的笼具;

(2)饲具及饮水用具应能进行消毒,不生锈者。

5.管理条件:

(1)制度:要有动物室规程,操作规程岗位责任制,工作定额;

(2)工作记录:有笼卡,有饲养室日记,有动物帐目;

(3)环境记录:温度、湿度等要如实填写;

(4)人员卫生:要穿清洁的工作服,戴工作帽,口罩,手套,工作鞋等;

(5)铺垫物要消毒;

(6)要有动物室工作人员专用的洗澡设备。

6.卫生防疫设施:

(1)要有洗刷、消毒设备和制度;

(2)有隔离、检疫设施以及防疫措施。

(二)清洁动物

除达到普通动物要求之外,还必须达到下列各项要求:

1.建筑条件:

(1)尽可能做到清洁与污染分开;

(2)门、窗要达到密封的要求;

(3)有缓冲间;

(4)有沐浴室或更衣室。

2.饲育室内环境条件:

(1)相对湿度 60%±5%;

(2)室内噪声在55分贝以下;

(3)换气装置:强力通风,有中效过滤,有空调装置;

(4)换气次数:全新风8次/小时,室内为正压;

(5)室内无昆虫;

(6)室内照明:明暗各12小时左右,或符合要求的自然采光;

(7)饲养室内墙壁的较低部位及地面每周消毒两次;

(8)排污物(包括铺垫物等)设施应是半封闭式的,能进行消毒,以防交叉污染。

3.管理条件:

(1)工作服、帽、饲料、笼、饲具有等要消毒;

(2)工作人员进入饲育区之前,最好要沐浴更衣。

无特殊病原体动物与无菌动物设备的要求,各单位可根据相应的病原菌和病毒检定标准而自行处理。

(三)实验动物实验室

动物实验室的检定标准最低要达到相应的实验动物饲育室的标准。具体要求参照上述条件。

三、实验动物病原菌检测等级标准

表一 实验动物病原菌检测等级标准

动物等级病原菌动物种类检验方法

 

小鼠大鼠豚鼠地鼠分离培养免疫诊断 

 

四级:无菌动物三级:无特殊病原体动物二级:清洁动物※种子应来源于剖腹产一级:普通动物沙门氏菌All Species of Salmonella
单核细胞增多性李氏杆菌Listeria monocytogenes
假结核耶氏菌 Yersinia Pseudotuberculosis
狗布鲁氏菌Brucella Canis
志贺氏痢疾菌Shigella
结核分枝杆菌 Mycobacterium tuberculosis
皮肤真菌 螺旋体
0
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0
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0
 
0
0
 
0
0
0







 


出血败血性巴氏杆菌Pasterella multocida
支气管败血性包特氏菌 Bordetella bronchiseptica
念珠状链杆菌Streptobacillus moniliformis
结肠耶尔氏菌Yersinia cnteroolitica
肺支原体Mycoplasma Pulmonis
神经支原体Mycoplasma neuroticum
关节支原体Mycoplasma arthritidis
鼠棒状杆菌Corynebacterium muris
泰泽氏菌Bacillus Piliformis
0
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0
0
0
0
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0
0
0
0
0
0







 


  
嗜肺巴氏杆菌Pasteurella Pneumotropica
克雷伯肺炎杆菌Kleb siella Pneumonia
金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus
肺炎链球菌Streptococcus pneumonia
化脓性链球菌Streptococcus pyogeones
绿脓杆菌Pseudomonas aerginosa
特定病原菌
0
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0
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0
0
0
0
0
0
     
*应排除一切可能查到的微生物注 V检验方式 ○要求没有 注:0要求没有

四、实验动物病毒检测等级标准

表二齿啮类实验动物的病毒检测等级标准

动物等级病 毒动物种类

 

小鼠大鼠豚鼠地鼠 

 

四级
:无菌动物
三级
:无特殊病原体动物
二级
:清洁动物
一级
:普通动物
淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒Fymphocytic Choriomeningitis virus(LCM)
流行性出血热病毒Epizootic hemorrhagic fever virus(EHFV)
小鼠脱脚病病毒(鼠痘病毒)Ectromlia uirus (Poxvirus of Mouse)
0
0
0
0
0
鼠肝炎病毒Mouse hepatitis virus (MHV)
猴病毒Simian virus5(SV5)
0  
0
 
0
仙台病毒Sendai virus
小鼠肺炎病毒Pneumonia virus of mice(PVM)
呼肠孤病毒3型Reovirus type 3(Reo-3)
小鼠脑脊髓炎病毒Mouse Encephalomyelitis virus
小鼠腺病毒Mouse Adenovirus (MAd)
K病毒K virus(KV)
小鼠微小病毒Minute virus of mice(MVM)
多瘤病毒Polyoma virus
小鼠脑心肌炎病毒Mouse Encephalomyocarditis virus
Toolan:s病毒(H-1)Toolan:s virus(H-1)
大鼠潜在病毒Kilham:s rat virus(KRV)
大鼠冠状病毒Rat corona virus(RCV)
大鼠涎泪膜炎病毒Sialodacryoadenitis virus
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
新生小鼠流行性腹泻病毒(EDIM)Epizootic diarrhea of infant mice (EDIM)
胸腺病毒Thymic virus
乳酸脱氢酶病毒Lactic Dehydrogenase virus(LDH)
小鼠巨细胞病毒Mouse cytomegalovirus(MCMV)
大鼠巨细胞病毒Rat cytomegalovirus(RCMV)
豚鼠巨细胞病毒Guinea pig cytomegalovirus(GPCMV)
豚鼠疱疹病毒Guinea pig herpesvirus
0
0
0
0
 
0
 
0
0

注:0要求没有
表三实验兔、、狗、猴的病毒检测等级标准

动物等级病毒动物种类

 

 

 

四级
:无菌动物
三级
:无特殊病原体动物
二级
:清洁动物
一级
:普通动物
狂犬病毒Rabies virus
B病毒B virus
0 0 0
猫白细胞减少症病毒(细小病毒)Feline Panleukopenia virus
狗细小病毒Canine Parvcvirus
猴泡沫病毒Simian Spumavirus
猴病毒Simian virus 40(SV 40)
0 00
0
病毒性肝炎病毒(狗腺病毒)Canine viral hepatitis virus
兔痘病毒Rabbit Poxvirus
兔轮状病毒Rabbit rotavirus
兔疱疹病毒Rabbit herpesvirus
兔冠状病毒Rabbit coranvirus
猫轮状病毒Feline rotavirus
猫冠状毒素Feline coroanvirus
猫嵌杯样病毒Feline calicirus
狗轮状病毒Canine rotavirus
猫病毒性鼻气管炎病毒(疱疹病毒)Feline rhinotracheitis virus
狗疱疹病毒Canine herpesvirus
狗痘热病毒(副流感病毒)Canine distemper virus
猴痘病毒Simian poxvirus
猴轮状病毒Simian rotavirus
猴腺病毒Simian adenovirus
0
0
0
0
 
0
0
0
0
0
0
0
0

0
0
0
     

注:0要求没有

五、实验动物寄生虫检测等级标准

表四 实验动物寄生虫监测等级标准

动物等级寄 生 虫动物种类

 

小鼠大鼠 

 

四级
:无菌动物
三级
:无特殊病原体动物
二级
:清洁动物
一级普通动物体外寄生虫(节肢动物)0000000
利杜体Leishmania donovani
弓浆虫Toxoplasma gondii
脑原虫Encephalitozoon
球状附红细胞体Eperiythrozoon coccoides
水泡带绦虫Taenia hydatigena
豆状带绦虫Taenia pisformis
猫泡尾带绦虫Hydatigena taeniaeformis
短膜壳绦虫Hymenolepis nana
长膜壳绦虫Hymenolepis diminuta
孟氏裂头绦虫Spirometra mansoni
华枝睾吸虫Clonorchis sinensis
猫后睾吸虫Opisthorchis felineus
卫氏并殖吸虫Paragonimus westermani
猫钩虫A brasiliense
犬弓蛔虫Toxocara canis
鼠管状线虫Syphacea obvelata
四翼无刺线虫Aspiculuris tetraptera
结膜吸吮线虫Thelazia callipaeda
棘腭口线虫Cnathostoma spinigerum
犬恶丝虫Dirofilaria immitis
猴结节线虫Oesophagostomum apiostomum
肾膨结线虫Dioatophyma renale
鼠肝体Hepatozoon muris
肝毛线虫Capillarria hepatica
猫弓蛔虫Toxocara cati
兔晓虫Passalurus ambiguus
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
O
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
 
体内、外所有寄生虫0000000  

六、实验动物的病理检查标准

一级:普通动物

外观:毛色光泽清洁,贴身、活沷,行动无异常。头脸不肿、背不穹起。四肢、尾和皮肤无缺损。不喘,鼻无分泌物。肛门清洁。

病理解剖:肝、脾、淋巴结不肿大。肺、肝、脾、肾无肉眼可见病灶。

二级:清洁动物

具有一级普通动物指标,显微镜检查没有二级微生物病原的病变。

三级:无特殊病原体动物

具有一级普通动物指标和,无二和三级动物的微生物病原的病变。

四级:无菌动物

除具有一级普通动物指标外,不含有二和三级动物微生物病原的病变。脾、淋巴等脏器具有无菌动物的组织学结构。

有关遗传突变,免疫抑制等动物可根据各个品系特征的规定检查。

七、近交系大、小鼠遗传质量检测标准

(一)管理制度

1.引种来源清楚,应带有谱系及特性资料(如近交代数、交配方式、遗传组成、生物学特性),并应符合国际公认的遗传概貌标准。

2.按国际规定的近交系动物的繁殖系统,进行种群维持和生产。

(1)基础群和血缘扩大群:

应以同胞兄妹交配方法进行。基础群的维持一定按着近交系的保种方法进行,并应具有谱系及个体卡片记录。

(2)生产群:

以随机交配方法(或红绿灯方法)进行生产。可连续繁殖3-5代,其生产群种鼠应与基础群血缘关系保持相对平行。

(二)遗传质量检查

1.方法的选择:

(1)异体皮肤移殖法:无论是大鼠,还是小鼠异体皮肤移植的方法,一直是鉴定近交品系的经典方法,由于该方法既经济,又权威,为首选方法。

(2)生化电泳方www.med126.com/kuaiji/法:是近些年来利用同功酶和蛋白质的多态性对近交系动物进行遗传监测的一种常规方法。由于其快速、准确、灵敏,在检出亚系动物时,比起皮肤移殖法,有其独特之处,可作为近交系小鼠遗传质量检查的又一重要方法。

2.位点的选择:

近交系动物遗传品质的变异,主要有三方面的因素:

(1)遗传污染;

(2)遗传漂变;

(3)遗传突变。

在这三方面中遗传污染危害最大,而另两方面,在一定时间内发生改变的频率很低。因此,在位点选择上,根据北京市现在常用的10种近交系小鼠,选择了位于7个染色体上八个差异性位点,作为检查的第一线位点。如果任何一种品系发生过遗传污染,这八个位点中某些位点将会出现杂合或者变异。考虑到位点的选择尽量分布在多个染色体上,我们又选择了位于5个染色体上的五个比较容易操作,耗资较少的位点作为第二线位点的检查。原则上,第一线位点的检查如果发现了问题,将不再进行第二线位点的检查。

第一线位点:

Hbb,Car-2,Gpd,ES-1,ES-3,Trf,Gp1,ldh-1。

第二线位点:

Mup,Pgm-1,ES-10,Sep-1,Ce-2。

3.动物的选择:

近交系大、小鼠每个品系至少进行四只动物的异体皮肤移植。近交系小鼠皮肤移植成功者还需从核心群中选送四只动物(2♀,2♂年龄不限)进行生化位点的检查。皮肤移植失败者,则不考虑进行生化位点的检查。

4.结果的判断:

将检测报告汇总,由专家小组作出结论。

见附表五:差异性位点的选择和10种近交系小鼠的遗传概貌。

表五

Chromosome Locus/Strain734811971
HbbCar-2GpdES-1ES-3TrfGpiLdh-1 
615Sawww.med126.com/Article/bbObaa
TA1Sbbaab a
Ta2dabbcbba
T739SbbbObaa
BALA/Cdbbbabaa
C57BL/OSaaaabba
CBA/Ndabbcabb
C3H/Hedbbbcbba
DBA/2dbbbcbab
KKSaabcbba

八、实验动物饲料的要求

供给营养适宜的饮料是保证实验动物正常生长、发育、繁殖以及各种外界因素的反应保持相对恒定,增强体质的重要条件。特要求如下:

(一)适宜的营养成分

见表。

实验动物饲料的各种营养供给参考标准

动物种类/营养成分大鼠、小鼠、地鼠家兔、豚鼠
蛋白质克%20-2518-20
脂肪克%5-104-8
钙克%0.9-1.21.2-1.5
磷克%0.6-0.80.8-1.0
赖氨酸克%8-107-9
蛋氨酸克%4-64-6
维生素A I·U/100克15001500
维生素D I·U/100克200200
维生素C mg/100 克060-80

考虑到原粮中维生素E含量已够,故表中不再例入。特殊的实验需要可加入5-10mg/100g。

注:除以上主要营养成分,还必需有适宜量的维生素、微量元素及纤维素等营养成分。

(二)科学设计各种实验动物饲料配方

1.各种实验动物的饮料配方,应根据其不同需要量科学设计。

2.应根据不同实验动物的特异需要,适当添加蛋白质、维生素C及纤维素等。

3.确定后的饮料配方不得任意更改,力求稳定。

4.饲料中不得添加抗菌剂、抗虫剂、防腐防霉剂及激素等其它药物。

5.不得用非标准饲料,饲养实验动物。

(三)原料要求及保管

1.精选新鲜、无杂质、无毒、无污染、无霉变、无虫蛀鼠咬的各种原料。

2.应设专门饲料库房:

饲料库房应保持干燥、通风、无虫、无野鼠,经常保持清洁卫生,各种饲料或原料应分类堆放整洁。

3.维生素类原料应存放在避光、低温、干燥处。

4.加工后成品与原料应分开保管。

5.饲料库房内严禁存放杂品及毒性药品等。

6.饲料库必须严格领发、保管制度及完善管理手续。

(四)加工制作

选择优质原料按饲料配方比,准确称重,充分混匀。植物油、维生素及无机盐类先与少量粉料混匀再与大量粉料充分混匀后加工。制成的料块应有适宜的硬度及适品性。

料块成品装入无毒清洁饲料桶或清洁牛皮纸袋内,封口贴有或挂有注明饲料种类、制作日期及制作人的标签,成品料块存放不得超过两个月。

(五)定期检测分析营养成分

各种饮料成品应每半年抽样检测单位,分析营养成分一次。特殊情况必要时随时抽样检测分析。

九、实验动物检疫要求

为了预防实验动物群体中发生传染病。避免新引起的动物对原有动物及有关人员造成危害,提高实验动物的健康水平,特规定如下:

1.新引起的动物必须隔离,确认无病之后,方可移入饲养区。 2.不从疫区引起动物。3.动物发生传染病死亡应及时进行处理(病理尸检或实验室检查)作出诊断,提出处理意见,报请有关负责人及主管部门。 4.有病的动物不准做动物实验,发生传染病时,原则上全部销毁。房屋、用具、笼具架、垫料、衣服、鞋帽等必须进行彻底消毒,动物室封锁一定时间后才能开放。 5.实验动物发生烈性传染病流行时,应立即报告北京医学实验动物管理委员会,同时采取严格的隔离措施,以兔传染病蔓延。如有拖延或隐瞒不报者,所在单位要承担责任,并吊销其合格证。 6.野生动物的检疫,应由使用单位就地进行,在确认无人畜共患病及动物传染病之后方可使用。

 

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