二、免疫金银法
1983年，Holgate等人将IGS与银显影方法相结合创立了免疫金银法（Immunogold—sliver staining, IGSS)IGSS的基本原理是通过免疫反应沉积在抗原位置的胶体金颗粒起着一种催化剂作用，用对苯二酚还原剂将银离子（Ag+)还原成银原子（Ago)。被还原的银原子于是围绕金颗粒形成一个“银壳”，“银壳”一旦形成本身亦具有催化作用，从而使更多银离子还原并促使“银壳”越长越大“，最终抗原位置得到清楚放大。请参见图5-4。
图5-4 用银增敏示意图
（一)石蜡切片的IGSS染色
以人肝细胞内HBsAg定位举例说明。
（1)切片常规脱蜡至水。
（2)Lugol＇s液，5min.
（3)5%硫代硫酸钠水溶液脱碘5min。
（4)用双蒸馏水冲洗干净。
（5)0.05mol/l pH7.4 TBS洗5min两次。
（6)用0.1%胰蛋白酶消化10min或用3mol/L尿素消化20min。
（7)0.05mol/l pH7.4 TBS洗5min一次。
（8)1%卵白蛋白封闭15min。
（9)马抗HBsAg抗体1：1000稀释，37℃1～2h 或4℃过夜。
（10)0.05mol/l pH7.4 TBS洗5min两次。
（11)1%卵白蛋白封闭10min。
（12)1：40，PAG，37℃45min。
（13)0.05mol/l pH7.4 TBS洗5min两次。
（14)双蒸水洗5min，两次。
（15)物理显影见后所述。
（16)双蒸水洗5min，两次。
（17)苏木素衬染。
（18)酒精常规脱水，透明，封固。
结果，光镜下见肝细胞胞浆内有膜或包涵体形分布的阳性黑色状颗粒，背景干净。
（二)冰冻切片的IGSS染色
作冰冻切片的组织，若在动物试验可以先经过固定液灌注或浸泡固定，也可不固定先做冰冻切片。人的组织也可通过浸泡固定或不固定，这主要根据保存抗原性的需要而定。固定过的组织可用20%蔗糖PBS（0.01mol/l pH7.2)浸泡2～4h或在切片时用OCT包埋，以减少冰冻切片过程中冰晶的形成。如果切片还准备用于电镜包埋，则可经过5%，10%，20%浓度逐级递增的蔗糖溶液。在冰冻切片前，可先入氟里昂–22 （Freon--22)骤冷，这样可使组织的结构保存更好，适用于电镜观察。
（1)冰冻切片。
（2)Lugol＇s液，5min.
以下步骤同人肝HBsAg的染色方法。
